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课题3　血红蛋白的提取和分离课堂实录及点评｜教案在线预览

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关键词：课题3　血红蛋白�…课堂实录及点评

正文

“小组互助教学”教师一课二备记录表

集体备课（主备人冯洁玲）

课题名称

课时教学目标

重、难点分析

本课题总课时数：1 课题 3 血红蛋白的提取和分离

第 1 课时

了解色谱法、电泳法等分离大分子的基本原理

重点：凝胶色谱法的原理和方法

难点：样品的预处理，色谱柱填料处理和色谱柱的装填

二次备课

教师姓名：参加人员

谭振海、叶国宜、袁秋容、冯洁玲、岑雍贤

教学过程

教学内容/自主.互助教学活动设计

课题 3 血红蛋白的提取和分离

5.3.1 凝胶色谱法

＊凝胶色谱法也叫分配色谱法，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法

＊

凝胶色谱法分离蛋白质的原理：

凝胶色谱法中所用的凝胶为多糖类物质构成的微小的多孔球体，小球体内部有许多贯穿的通道。

相对分子质量大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快；相对分子质量小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢。

不同相对分子质量的蛋白质因此得以分离（如下图所示）

学生学习活动组织

＊

凝胶色谱操作步骤：

说明：本实验所用凝胶为

Sephadex G-75。Sephadex 表示交联葡聚糖；

G 表示凝胶的交联程度、膨胀程度及分离范围；75 表示凝胶得水值，

即每克凝胶膨胀时吸水

7.5g。

讨论：整个凝胶色谱操作过程中，绝不允许露出凝胶颗粒（即凝胶颗粒直接与空气接触）的情况出现，否则需要重做。为什么？

注意：整个凝胶色谱操作过程中，绝不允许露出凝胶颗粒（即凝胶颗粒直接与空气接触）的情况出现，否则需要重做。 5.3.2 缓冲溶液

＊缓冲溶液是指能够抵制外界的酸碱对溶液 pH 的影响，维持 pH 基本不变的溶液。缓冲溶液通常由 1 ～ 2 种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的使用比例可以制得不同 pH 范围的缓冲液

5.3.3 电泳＊电泳的原理：电泳利用各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同，使带电粒子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离＊琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳是两种最常用的电泳说明：聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺和交联剂 N，N'- 亚甲基双丙烯酰胺在引发剂和催化剂作用下交联而成的（无需记忆）。

＊ SDS 聚丙烯酰胺凝胶（聚丙烯酰胺凝胶中加入 SDS）电泳中，SDS 一方面使蛋白质完全变性 ( 血红蛋白变性后，解聚成四条肽链 )；另一

方面 SDS 能与蛋白质形成蛋白质 -SDS 复合物，SDS 所带的电荷远超

过蛋白质分子的原有电荷，掩盖了不同蛋白质之间的电荷差别，因此

电泳迁移率完全取决于分子的大小 ( 据此可用于测定蛋白质的相对分

子质量 ) 5.2.4 血红蛋白提取与分离的流程及分析

说明：电泳时，迁移率一般正比于带电量，反比于分子大小（这是因为电泳所用的凝胶中没有色谱时凝胶颗粒之间的那种大的空隙，所有

物质通过电泳凝胶时都需要通过大致相同的网格间隙）。

说明：血红蛋白由两条α链和两条β链构成，同时由于含有血红素而呈现红色，用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳时，4 条肽链因蛋白质变性

而分开。

金版学案

作业布置

课后反思

资料摘要

课题3　血红蛋白的提取和分离课堂实录及点评