课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教案3

2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 学案

人教版选修一

【活动目标】：1.利用选择培养基分离细菌。

2.运用活菌计数法测定土壤中尿素细菌的数量。

【活动重点】：运用活菌计数法测定土壤中尿素细菌的数量。

【活动难点】：运用活菌计数法测定土壤中尿素细菌的数量。 【活动方案】： 活动一、关于菌种的筛选和计数

1．菌株的筛选

(1)自然界中目的菌株的筛选

根据它对____________的要求到相应的环境中去寻找。请举一例：

(2)实验室目的菌株的筛选

原理：人为提供有利于________菌株生长的条件(包括营养、温度、pH 值等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。

2．统计菌落数目的方法

(1)____________计数法

①过程：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在______

__下计算一定容积里样品中微生物的数量。

②缺点：不能区分死菌和活菌。

(2)间接计数法(活菌计数法) 根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个____________繁殖而成，按比例稀释样品后，将稀释液接种培养，统计________的数目。

[来源学科网ZXXK]思考：用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是

A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230

B．涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238

C．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163 D．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233 活动二、分离与计数土壤中分解尿素的细菌的实验

1．菌种筛选

(1)培养基：_____

__培养基。

(2)特点：________是唯一氮源。

2．统计菌落数目

(1)计算方法：①直接计数法；②间接计数法。

(2)平板计数公式：

每克样品中的菌株数＝__________________ 3．分离分解尿素的细菌的实验设计原则

(1)设立重复组原则

统计某一稀释度下的平板上的菌落数时，要至少涂布

3 个平板作重复组，来增强实验结果的说服力与准确性。

(2)对照原则：

对照实验的概念：除了被测试条件以外，其他条件都相同的实验。

主要目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响。提高实验的可信度。例如为了确认培养基是否被杂菌污染，需以

培养基培养作为空白对照。

①判断培养基中是否有杂菌污染，需将未接种的培养基同时进行培养。

②判断选择培养基是否具有筛选作用，需设立牛肉膏蛋白胨培养基进行接种后培养，观察两

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种培养基上的菌落数目，进行对比得出结论。

4．实验流程：

5.分解尿素的细菌的鉴别

(1)在培养基中加入酚红指示剂，则培养基会变红；(2)检测

pH 的变化来判断是否存在。

活动三、从土壤中分离微生物的方法与计数

操作步骤

土壤取样

样品稀释

操作要求和注意事项

从距离地面

3～8 cm 的土壤层取样

测定细菌：选用稀释

104

、105

、106

倍

测定放线菌：选用稀释

103

、104

、105

倍

测定真菌：选用稀释

102

、103

、104

倍

细菌：30～37 ℃；1～2 d 培养与观察

放线菌：25～28 ℃；5～7 d 真菌：25～28 ℃；3～4 d 计数

每克样品中的菌株数＝(C/V)×M，

C——某一稀释液浓度下平板上生长的平均菌落数；

V——涂布平板所用稀释液体积(ml)；M——稀释倍数

[来源学#科#网]【课堂反馈】：

1.在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称作

A．鉴别培养基

B．加富培养基

C．选择培养基

D．基础培养基

2.对表层土壤中自生固氮菌的分离采取的原理(方法)是

A．依据自生固氮菌的生长繁殖不需要氮源

B．依据不同微生物生长繁殖所需

pH 不同

C．依据不同微生物生长繁殖所需温度条件不同

D．依据不同微生物代谢类型不同

3.选择土壤中分解尿素的微生物，所用氮源为

A．硝酸

B．氨

C．尿素

D．蛋白胨

4.在做“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验时，甲组实验用氮源只含尿素的培养基，乙组实验用氮源除尿素外还含硝酸盐的培养基，其他成分都相同，在相同条件下操作、培养与观察，则乙组实验属于

A．空白对照

B．标准对照

C．相互对照

D．条件对照

5.分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是

①加尿素

②不加尿素

③加琼脂

④不加琼脂

⑤加葡萄糖

⑥不加葡萄糖

⑦加硝酸盐

⑧不加硝酸盐

A．①③⑤⑦

B．②④⑥⑧

C．①③⑤⑧

D．①④⑥⑦

6.用来判断选择培养基是否起到了选择作用，需要设置的对照是

A．未接种的选择培养基

B．未接种的牛肉膏蛋白胨培养基

C．接种了的牛肉膏蛋白胨培养基

D．接种了的选择培养基

【课后作业】：

1．PCR是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，所需要的酶是从什么菌中提取的

①Taq细菌

②芽孢杆菌

③火球菌

④病毒

A．①②

B．②③

C．③④

D．①③

2．下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是

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A．KH2PO4、Naz HP04、MgS04·7H20、葡萄糖、尿素、琼脂、水

B．KH2P04、Na2HPO4、MgSO4·7H20、葡萄糖、琼脂、水

C．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、尿素、琼脂、水

D．KH2P04、Na2 HP04、MgSO4·7H20、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水

3．某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上

菌落数的平均值为234，那么每克样品中的菌落

数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL)

A．2.34X108

B．2.34X109

C．234

D．23．4

4．在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应106倍稀释的培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个茵落。A同学的结果产生原因可能有

①由于土样不同

②由于培养基污染

③由于操作失误

④没有设置对照

A．①②③

B．②③④

C．①③④

D．①②④

5．关于土壤取样的叙述错误的是

A．土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤

B．先铲去表层土3 cm左右，再取样

C．取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌

D．应在火焰旁称取土壤

6.关于测定土壤中细菌的数量，正确叙述是

[来源学#科#网]

A．一般选用103～107倍的稀释液分别涂布

B．测定放线菌的数量，一般选用103、104和105倍稀释

C．测定真菌的数量，一般选用103、104和105倍稀释

D．当第一次测量某种细菌的数量，可以将101～107倍的稀释液分别涂布到平板上培养

7.关于微生物的培养，叙述错误的是

A．细菌一般在30～37"C的温度下培养1～2 d

B．放线菌一般在25～28~C的温度下培养5～7 d

C．霉菌一般在25～28~C的温度下培养3～4 d

D．不同种类的微生物，一般需要相同的培养温度和培养时间

8.需要在火焰旁操作的有

①土壤取样

②称取土壤

③稀释土壤溶液

④涂布平板⑤微生物的培养

A．①②③④⑤

B．②③④⑤

C．③④⑤

D．②③④

9.可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是

A．以尿素为惟一氮源的培养基中加入酚红指示剂

B．以尿素为惟一氮源的培养基中加入二苯胺试剂

C．以尿素为惟一氮源的培养基中加入苏丹Ⅲ试剂

D．以尿素为惟一氮源的培养基中加入双缩脲试剂

10下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述中，错误的是

A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板

B．取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上

C．将实验组和对照组平板倒置，37 ℃恒温培养24～48h D．确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数

11.苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所示，①为土壤样品。请回答下列问题。

[来源学科网Z|X|X|K]

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(1)②中培养目的菌株的选择培养基中应加入______作为碳源，②中不同浓度碳源的培养基______(A.影响；B.不影响)细菌的数量，如果要测定②中活细菌数量，常采用______法。

(2)④为对照，微生物在④中不生长，在⑤中生长，④与⑤培养基的主要区别在于__________ ________

__；使用____________法可以在⑥上获得单菌落。采用固体平板培养细菌时进行倒置培养的原因是____________________________________________________ _________________________________________。

(3)实验过程中如何防止其他微生物的污染？

___________________________________________________。

12.尿素是一种重要的农业肥料，但若不经过细菌分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，同学们试图探究土壤中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿15 g 琼脂

素的细菌(目的菌)。培养基成分如表所示，1 g 尿素

实验步骤如图所示。请分析回答问题。

10 g

葡萄糖

(1)培养基中加入尿素的目的是筛选______

MgSO4·7H2O 0.2 g __，

[来源:Z.xx.k.Com]Na2HPO4

2.1 g 这种培养基属于________培养基。

(2)“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来KH2PO4

1.4 g 自培养基中的_____

__和___

将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到

100 mL __，实验需要振荡培养，原因是___________________ ___________________________。

(3)转为固体培养基时，常采用________的方法接种，获得单菌落后继续筛选。

(4)下列材料或用具：①培养细菌用的培养基与培养皿；②玻璃棒、试管、锥形瓶和吸管；③实验操作者的双手。其中需要灭菌的是________；需要消毒的是________。(填序号) (5)在进行分离分解尿素的细菌的实验时，A同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只筛选出大约50个菌落。A同学的实验结果产生的原因可能有______。(填序号) ①由于土样不同

②由于培养基污染

③由于操作失误

④没有设置对照

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