附录4　常用的消毒灭菌操作方法名师教学视频（文字实录）

附录4.常用的消毒灭菌操作方法教学设计

《生物技术实践》各个课题都必须在实验室中完成，为方便实验的进行和保证实验操作的安全，在教科书的附录，载有生物实验室的基本安全规则，常用的消毒灭菌操作方法，常用化学抑菌剂，等几个附录，有助于实验的准备和参考。专题2的微生物的培养与应用与专题3植物组织培养技术课题中的实验都有要求无菌操作。由于实验相关材料用具进行灭菌操作时间过长，为了更好的统筹安排课时，灭菌过程放在课下，由教师录制视频，小组同学协助操作完成。

一．

教学目标及核心素养

1.教学目标

知识目标：了解有关无菌操作知识

能力目标：能够正确使用灭菌仪器，掌握无菌操作技能。

情感态度价值观：认识生物科学的价值，乐于学习生物科学，养成质疑求实创新，勇于实践的科学精神和严谨科学态度。

2.核心素养

生命观：结合实验操作，举例说出无菌操作技术的基本原理

科学探究：针对实验需求，选取恰当的灭菌操作方法进行灭菌操作

科学思维：基于生物学基本概念和原理，就生物技术无菌操作问题表明自己观点并展开讨论

二．教学策略

问题探究式，

情境设计：1.发酵工程要获得纯净的微生物需要要用到培养基，刚刚配好的培养基我们能否直接用它来接种所需培养的微生物呢？为什么？

微生物虽然小，我们肉眼看不见，但是它们却无时无刻不存在于我们的四周，空气，土壤，水等等，都有微生物的存在，就连我们的身体里，衣服上，皮肤上，手上，也有许多微生物存在。

如果微生物培养实验，植物组织培养的实验环境有其他微生物干扰，那么就会影响实验结果。获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，无菌技术围绕着如何避免杂菌的污染展开，

2.什么是无菌技术

无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术。如：接种实验操在酒精灯火焰附近（无菌区域）操作，或者是在紫外灯照射灭菌过的小型接种室（无菌区域）操作。除了操作环境要求无菌，所用到的实验器材也要事先经过无菌处理。无菌处理的方法有两种：消毒和灭菌

3.消毒与灭菌的概念及两者区别？请大家从以下的物质中分出哪些适合消毒，哪些适合灭菌（培养皿5，锥形瓶，试管带塞，接菌环，镊子，玻璃棒，手指，外植体）

消毒：是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢（细菌休眠体），孢子（生殖细胞）），家里自制酸奶用的培养缸事先要100℃煮沸水5-6分钟，巴氏消毒牛奶70-75℃保存牛奶营养，杀死牛奶中微生物，医用酒精擦拭双手，氯气消毒水源等，

灭菌：则是指用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物。

可以灼烧灭菌，微生物的接种工具比如接种环在酒精灯火焰充分燃烧层（外延）灼烧，可以迅速彻底的灭菌（使用前要冷却温度），在接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰灼烧来灭菌。

较多的实验器材要灭菌的话可以用到干热灭菌箱或者是高压蒸汽灭菌。用干热的空气或高热的水蒸气来达到快速灭菌的目的。

接下来我们各个小组代表就来负责为接下来实验进行灭菌操作

一．

干热灭菌的操作方法

干热灭菌法:是利用干热空气或火焰使细菌的原生质凝固，并使细菌的酶系统破坏而杀死细菌的方法。多用于容器及用具的灭菌.适用于耐高温的玻璃、金属等用具。

提醒操作的同学在操作过程中需要的注意事项：

1.

将待灭菌的物品，如塞上面塞的试管，锥形瓶，培养皿，吸管等玻璃仪器，用牛皮纸或干净的报纸包裹严密后，放入干热灭菌箱，注意，物品不要摆的太挤，以免妨碍热空气流通。同时，灭菌物品也不要与干热灭菌箱内壁的铁板接触，以防包装纸烤焦起火。

2.

灭菌

关好干热灭菌箱的箱门，旋动恒温调节器，设定温度为160℃-170℃。当温度升到150℃左右时，保持此温度3—4h。由于干热灭菌温度较高，操作时要注意防止烫伤。

3．降温

关掉电源，自然降温

4. 开箱取物 等温度降到70℃以下后，打开箱门，取出灭菌物品。注意温度末降到70℃以前，切勿打开箱门，以免玻璃器皿炸裂。

二．高压灭菌的操作方法（灭培养基）

使用高压蒸气灭菌，是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾产生蒸汽，待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。

提醒操作的同学在操作过程中的注意事项：

操作过程：

1.首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架（支撑架）平齐。每次操作前先观察水量是否充足，以免不能正常工作或发生意外。

2.拿出储物桶，放好搁板，将待灭菌的物品予以妥善的包扎，放入储物桶内。注意不要装的太挤，以免妨碍蒸汽流通而影响灭菌效果。锥形瓶与试管口不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包裹瓶口的纸而透入棉塞。然后把储物桶置如加热桶体内的搁架上。

3.加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内（内侧半圆槽）。拧紧固定盖子的螺栓，注意要同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，不漏气。

4.加热灭菌锅，打开排气阀（放气阀的小扳手提到竖直位置），桶内空气随加热时排出，待较急的蒸汽喷出时，再将扳手置回原位。让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐步上升。当锅内压力达到安全阀控制范围时，灭菌器会间歇性放汽，开始保温，并计时。

（100kPa,121℃，15-30min）

5.到灭菌时间后，切断热源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降到零时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。如果提前打开排气阀，锅内压力突然下降，灭菌容器内的液体会冲出容器，造成污染。所以必须待其自然降压，压力表指针回零后立即打开器盖（锅还是烫的）。如果没有及时打开锅盖盖子，不能打开，可先将放汽阀小扳手竖起即可。

6.干燥：实验器皿等物品灭菌后要迅速干燥，可在计时终了，压力表指针回零后1-2min,打开器皿，通电加热10-10min,水蒸气蒸发干燥。也可用专门的烘干箱来烘干。

三．紫外线灭菌的操作方法

紫外线只适用于表面灭菌和空气灭菌。以面积为10㎡的普通小型接种室为例，在工作台上方距地面2米处悬挂1—2只30W紫外灯，每次开灯照射30min，就能达到室内空气灭菌的目的。照射前，适量喷洒石碳酸等化学抑菌剂，可以加强灭菌效果。

实验思考：你认为在灭菌操作过程中有哪些需要注意的事项。

教学反思：本节课内容量不大，可与其它章节合并以微课的形式展示给学生，结合相关灭菌过程的操作让学生更深刻体会无菌操作技术，并对相关的注意事项有一个更切身的感受。但是由于时间和场地限制，不能让每一位同学都进行实物操作，所以本次设计也是想借此学生代表操作的视频，总结并发现问题，待正式课堂上进行错误展示，以此加深学生理论学习印象。