课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教案评析

江门市棠下中学2018～2019学年第一学期

高三生物导学案

编号：6

编制：叶金梅

审核：罗惠峰

审核时间：2019.3.5 选修1

专题2

微生物的培养与应用

课题2

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

班别：____________

姓名：____________

学习目标

1、研究筛选微生物的原理；

3、利用稀释涂布平板发进行微生物数量的测定；

4、对培养结果进行分析与评价。

重点：对土样的选取和选择培养基的配制。

难点：对分解尿素的细菌的计数。

目标达成（自评）

2、利用选择培养基从土壤中分离分解尿素的细菌；

自评说明：

A 完全掌握；

B 明白但不会运用；

C 不明白

【导】：尿素是一种重要的农业氮肥，但只有特定的细菌才能分解尿素，利用尿素，那怎么样才能把这些细菌选择出来并鉴别呢？

【思】：自主学习——阅读教材P21～26，思考下列问题：

问题导学

1、土壤中分解尿素的细菌的分离方法？

2、如何统计菌落数目？

探究未知：我的疑惑

【议】：

一、筛选菌株

1、自然界中目的菌株筛选的依据：根据它对 的要求，到相应的环境中去寻找。如Taq DNA聚合酶。

2、实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于 生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时

或

其他微生物生长。

阅读教材P22 左上方的培养基配方，请思考分析问题1、2及问题3、4。

问题1提示：在该配方中，碳源是

，氮源是

。

问题2提示：尿素作为培养基中 ，原则上只有能够利用 的微生物才能够生长。

：在微生物学中，将

特定种类的微生物生长，同时

或

其他种类微生物生长的培养基。

问题3：如何验证该选择培养基的确筛选到了能分解尿素的细菌？

问题4：如何验证所用的选择培养基没有受到污染？

寄语：鲜花与荆棘同路，汗水伴欢笑齐飞！

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审核时间：2019.3.5 二、微生物数量的测定

1、统计菌落数目的常用方法：

和

。

2、两种计数方法的比较

比较项目

间接计数法

显微镜直接计数（

）

法

原理

当样品的

足够高时，培养基表面生利用特定细菌技术板或血

长的一个菌落，来源于样品稀释液中细胞计数板，在显微镜下计

的

。通过统计平板上的菌落数，就算一定容积的样品中微生

能推测出样品中大约含有多少活菌。

物的数量

公式

每克样品中的菌株数=

每毫升原液所含细菌数：每

C：某一稀释度下平板上生长的

，

小格平均细菌数×400×

V：涂布平板时所用的

，

10000×稀释倍数

M：

。

缺点

当两个或多个细胞连在一起时，平板上观不能区分死菌、活菌

察到的只是一个菌落

误差

比实际值偏

比实际值偏

3、阅读教材P22 “统计菌落数目”的小字部分资料，请思考分析问题。

提示1：第一位同学只涂布了一个平板，没有设置

，因此结果

。

提示2：第二位同学重复实验的一个结果与另2个相差

，说明操作过程中出现了

，因此不能简单地

。那能否舍弃21再取平均值呢？

【练一练】某同学在三种稀释度下吸取0.1mL的菌液涂布平板，统计菌落数，得到了以下的数据，试计算1g样品的活菌数。

稀释度

平板1 平板2 平板3 104

320 360 356 510

212 234 287 610

21 23 18 三、设置对照

思考分析“设置对照”中的实例，探讨下列问题：

1、在A同学确定自己操作无误的情况下，A同学得出的菌落数多于其他同学的原因可能有哪些？

提示：一是由于

不同，二是由于

或操作失误。

2、如何设计对照实验帮助A同学排除上述两个可能影响实验结果的因素？

小结:对照和重复的设置

比较项目

对照

目的

实例

排除

对实验结果的影响，提高实验结果的可信度

重复

排除

对实验结果的影响，增强实验的说服力与准确性

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空白对照：确定培养基

同一稀释度涂布至少

个平板

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审核时间：2019.3.5 四、实验设计

（1）土壤取样：富含有机质的土壤 土

（2）样品的稀释：通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数

在 、适于计数的平板

（3）接种：用 法接种

①细菌： ℃培养1～2天

（4）培养：

②放线菌：25～28℃培养 天

（温度、时间）

③霉菌： ℃培养 天

（5）观察：根据菌落的特征（形状、大小、隆起程度和颜色等）区分微生物。

（6）计数：每隔24h统计一次 的数目，选取菌落数目 时的记录作为结果

（7）计算：根据公式计算单位体积中的菌体数。

五、操作提示

六、分解尿素的细菌的鉴别

1、方法：在以 为唯一 的培养基中加入 指示剂。

2、原理：细菌合成的 将尿素分解成 ，它会使pH ，可使酚红指示剂变 。

3、其他实例：

鉴别大肠杆菌的培养基—— 培养基，大肠杆菌的菌落呈现 。 【展】：展示小组讨论结果。

【评】：课堂小结——尝试构建“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”的知识体系

土壤

中分解尿

素的

细菌的分

离与计数

筛选菌株：依据

的选择作用

研究思路

统计菌落数的方法：

设置对照试验和重复实验的作用

实验设计

土壤取样→

→微生物的培养与观察→计数

操作提示

无菌操作、做好标记、制定计划

【检】：

1、判断正误：

（1）只要培养基中有尿素即可筛选出分解尿素的细菌。（ ）

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江门市棠下中学2018～2019学年第一学期

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审核时间：2019.3.5 （2）统计样品中的活菌数目一般使用平板划线法。（ ）

（3）显微镜直接计数法统计的都是活菌。（ ）

（4）土壤样品稀释时不同的微生物应该选择不同的稀释度。（ ）

2、分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是（

）

选项

尿素

琼脂糖

葡萄糖

硝酸盐

A + + + + 注：+表示加入，

B －

－

－

－

－表示不加

C + + + －

D + －

－

+

3、（2016四川卷节选）图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程。

（1）图中选择培养基应以＿＿＿为唯一氮源；鉴别培养基还需添加＿＿作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成＿＿色。

（2）在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品溶液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。

该过程采取的接种方法是＿＿＿＿＿＿＿＿，每克土壤样品中的细菌数量为＿＿＿8×10个；与血细胞计数板相比，此计数方法测得的细菌数目较＿＿。

4、（2017全国I卷）某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。回答下列问题：

（1）有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生__________。能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，原因是__________________ __________________，但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用

是______________________________________________________（答出两点即可）。

（2）为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择____________________（填“尿素”“NH4NO3”或“尿素+NH4NO3”）作为氮源，不选择其他两组的原因是

______________________________________________________________________。

（3）用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有___________ ________________________________________________________（答出两点即可）。

5、在调查和分离湖水中耐盐细菌的实验中，先将10升湖水水样浓缩至10毫升，然后各取浓缩水样1毫升，涂布到多个培养皿中培养。请回答：

（1）可以通过提高培养基中____的浓度，筛选被调查细菌，这种培养基被称为____ 培养基。

（2）要提高实验结果的可靠性，排除培养基未彻底灭菌的可能性，应该设置的对照组是____________________________。为检验（1）中筛选方法的效果，可以设置的对照组是______________________________。

【练】：课后完成《新课堂》及课时训练5 寄语：鲜花与荆棘同路，汗水伴欢笑齐飞！

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