课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数名师教学设计

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

一、教学目标

1.利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数

2.分析研究思路的形成过程，找出共性和差异性

3.形成无菌不在的概念，养成讲究卫生的习惯

二、教学重点

对土样的选取和选择培养基的配制

三、教学难点

对分解尿素的细菌的计数

四、教学方法

启发式教学

五、教学工具

多媒体课件

六、教学过程

（一）筛选菌株

尿素是一种重要的氮肥，农作物不能（能，不能）直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为

氨和CO2

，这是因为细菌能合成

脲酶

。

【补充】PCR有关知识。

【阅读教材，从中找出下列问题答案】

1此案例给我们哪些启示？

要寻找目的菌株时，要根据它对生存条件的要求，到相应的环境中去寻找。

2为什么Taq细菌能从热泉中被筛选出来？

热泉的高温淘汰掉绝大多数细菌，只有嗜热的Taq细菌存活下来。

3实验室筛选微生物的原理是什么？

人为提供有利于目的菌株生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物生长。

【思考】

1该培养基从物理状态划分属于哪一类培养基？

固体培养基。

2碳源、氮源分别是什么？

葡萄糖、尿素。

3这种培养基对微生物是否具有选择作用？

有。

4是如何选择的？

该配方中，尿素是唯一的氮源。只有能够合成脲酶的微生物才能分解、利用尿素，才能生长繁殖。

从教材中找出选择培养基的概念。

解读：利用了微生物特定的生存需求或差异（如：营养、光照、温度、pH、射线、抗生素等特殊条件）筛选目的菌株。

如何判断选择培养基是否具有选择作用？

将等量的菌液接种到选择培养基和牛肉膏蛋白胨固体培养基（营养成分较全面，适宜绝大多数的微生物生长），相同且适宜的条件下培养一段时间，比较两个平板上菌落的数目。

5接种所用方法是什么？

稀释涂布平板法。

（二）统计菌落数目

1微生物体积微小，肉眼不可辨。若要统计微生物的数量，有哪些方法？

显微镜直接计数法、间接计数法（活菌计数法）。

2用显微镜直接计数除使用显微镜外，还要用到哪种必需的仪器？

血细胞（血球）计数板。

3此方法有哪些缺点？

不能区分死菌与活菌、个体小的细菌难以观察。

从教材中找出活菌计数法的原理，并回答下列问题。

4为了保证结果的准确，对稀释程度有何要求？

稀释之后，平板上菌落数一般在30~300个之间。

【思考】

1案例中，两名同学的方法问题分别是什么？

都存在差异。第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。

2为何用活菌计数法统计出的活菌数目比实际要低？

详见P22倒数第二段。

3为保证结果的准确，应注意哪些问题？

①平板上菌落数一般为30~300个；②进行重复试验。

（三）设置对照实验

阅读教材P22、23，回答下列问题。

1设置对照的目的是什么？

详见P22最后一段。

2非测试因素是什么？

无关变量。

【案例分析】

A同学与其他同学实验结果不同，可能的原因有三种（详见教材），从教材中找出。

如何帮助A同学排出其他两个可能影响实验结果的因素？

方案一：有的同学认为A的培养基被污染，可以？？？

方案二：有的同学认为A的培养基制作不标准而不具备选择作用，可以？？？

方案三：A同学认为是所取土壤样品不同导致实验结果不同，可以？？？

【思考】

•

判断培养基中是否有杂菌污染：

将未接种的培养基同时进行培养。

•

判断选择培养基是否具有筛选作用：

同时用完全培养基（如：牛肉膏蛋白胨固体培养基）接种后培养观察菌落数目。

【补充】常用对照方法

•

空白对照

例如对小白鼠进行抗癌药物的实验。实验组注射溶于棉籽油的抗癌药物，对照组注射？？？

•

标准对照

例如检测果酒发酵后是否有酒精产生。实验组取2mL发酵液用酸性重铬酸钾检测，对照组？？？

•

自身对照

例如观察质壁分离和复原。

•

相互对照

例如探究酶的最适温度、pH等。