课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教案1

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教学设计

教学目标：

（一）知识与技能

利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数

（二）过程与方法

分析研究思路的形成过程，找出共性和差异性

（三）情感、态度与价值观

形成无菌不在的概念，养成讲究卫生的习惯

教学重点：对土样的选取和选择培养基的配制

教学难点：对分解尿素的细菌的计数，从促进学生学习的角度恰当的解释评价数据，以增强学生的学习自信心。

教学过程:

1．基础知识

（1）. 尿素是一种重要的氮肥，农作物不能直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为

氨和CO2

，这是因为细菌能合成脲酶

。

（2）

科学家从热泉中把耐热细菌筛选出来，因为

热泉的高温条件淘汰了绝大多数微生物，这种方法也适用于实验室中微生物的筛选，原理是

人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、PH等），同时抑制或阻止其他微生物生长

。

二.导入：我们已经学习了培养基的配置以及接种技术，下面来学习如何进行细菌的分离，获得所需要的目的微生物。

三、学习新课：

1.研究思路：（1）筛选菌株：原理人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、PH等），同时抑制或阻止其他微生物生长

。生物适应一定环境，环境对生物具有选择作用。所以通过配制选择培养基、控制培养条件等选择目的微生物。

思考1在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是（葡萄糖

），提供氮源的的是( 尿素)，琼脂的作用是( 凝固剂)。

（2）设计对照：对照实验是指除了被测试的条件外，其他条件都相同的实验。满足该条件的称为对照组，未满足该条件的称为实验组。设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。

思考2该培养基对微生物（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是

只有能够以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长

。

思考3在统计菌落数目时，常用来统计样品中活菌数目的方法是（稀释涂布平板法）

。除此之外，

（显微镜直接计数

）

也是测定微生物数量的常用方法。

2.实验过程

（1）． 土样的采集

在长期使用尿素的农田内采集3-8cm深的土样200g用信封或牛皮纸袋带回实验室。

（2）． 培养基的制备

将5种物质溶解后，用容量瓶定容至1000ml。然后倒入大搪瓷烧杯中，并向其中加入琼脂15．0g，用电炉加热至琼脂完全溶解。在培养基半冷却时分装至经高压灭菌的培养皿中。冷却备用。

（3）． 样品的稀释

取10g土样容于90g水中，充分摇匀，然后在此溶液中取菌液1ml加无菌水9ml中继续稀释。以此方式继续将菌液稀释成一定浓度梯度。将稀释10000倍，100000倍及1000000倍的菌液各取0.1ml分别加入到事先加入培养基的培养皿中，轻轻摇动培养皿使菌液分布均匀。每种浓度重复3次。

（4）． 培养

将接种后的培养皿标记后室温培养48～72小时。

（5）． 记数

记录各浓度（菌液稀释倍数）下每培养皿内菌落的数目，计算3个培养皿内的平均值，进而计算出每克土壤中所含的细菌的数目。

【补充】显微镜直接计数是测定微生物的方法。

公式：观察到的红细胞平均数∶观察到的细菌平均数＝红细胞含量∶细菌含量

采用稀释涂布平板法统计菌落数目时，培养基表面生长的一个菌落，来源于

样品稀释液中一个活菌

。通过统计

平板上的菌落数

，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在

30～300 的平板进行计数。

设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。

方案1：其他同学用A同学的土样进行实验。

方案2：A同学以不接种的培养基作为空白对照。

3．结果分析与评价

（

1）.分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助生物化学的方法。

（2）.

在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的

脲酶

将尿素分解成了

氨

。氨会使培养基的碱性

增强

，PH 升高

。因此，我们可以通过检测培养基

pH 变化来判断该化学反应是否发生。

（3）.

在以

尿素

为唯一氮源的培养基中加入

酚红

指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够

分解尿素。

教学反思

选修的内容我们上的很快，而且没有专门检测和考试，所以感觉有点走马观花，本来很有趣味的内容上的平淡无味。今后的教学要在这方面改进。与生活结合比较紧的内容更应该让学生多思考，多动手。