课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数ppt配套教案和课堂实录

课题二

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

一．教学目标：

1.

利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数

2.

分析研究思路的形成过程，找出共性和差异

3.

形成无菌不在的概念，养成讲究卫生的习惯

二、教学重点

对土样的选取和选择培养基的配制

三、教学难点

对分解尿素的细菌的计数

四、教学方法

启发式教学

五、教学工具

多媒体课件

六、教学过程

（一）导引探究：

〖思考1〗在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是

葡萄糖

，提供氮源的的是

尿素

，琼脂的作用是

凝固剂

。

〖思考2〗该培养基对微生物

具有

（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是

只有能够以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长

。

〖思考3〗从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是

（平均菌落数÷涂布的稀释液体积）×稀释倍数

。

〖思考4〗利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是

恰当的稀释度

。

〖思考5〗第

二

位同学的结果接近真实值。你认为这两位同学的实验需要改进的操作是第一位同学需设置重复实验组；第二位同学统计的三个菌落数相差太大，说明操作有误，需重新实验。

〖思考6〗请设计本实验的实验组对照组

方案一：其他同学用A同学的土样进行实验

方案二：A同学以不接种的培养基作为空白对照

（二）实验设计

原理：

1.筛选菌株

（1）实验室中微生物的筛选应用的原理

人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。

（2）选择性培养基

在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。

（3）配制选择培养基的依据

根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。例如，培养基中不加入有机物可以选择培养自养微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培养能固氮的微生物；加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。

2.统计菌落数目

（1）测定微生物数量的常用方法有稀释涂布平板法和显微镜直接计数。

（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理

当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活细菌。为了保证结果准确，一般设置3～5个平板，选择菌落数在30～300的平板进行计数，并取平均值。

统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。

采用此方法的注意事项：1.一般选取菌落数在30~300之间的平板进行计数

3.设置对照

(1)对照实验：指除了被测试的条件外，其他条件都相同的实验。

(2)主要目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。

实验流程：

1.土壤取样：同其他生物环境相比，土壤中的微生物，数量最大，种类最多。在富含有机质的土壤表层，有更多的微生物生长。从富含有机物、潮湿、pH≈7的土壤中取样。铲去表层土，在距地表约3～8cm的土壤层取样。

2.样品的稀释：样品的稀释程度将直接影响平板上生长的菌落数目。在实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30~300之间、适于计数的平板。

3.微生物的培养与观察

不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。

细菌30~37℃

1~2天

放线菌25~28℃

5~7天

霉菌25~28℃

3~4天

同种微生物表现出稳定的菌落特征，形状、大小、隆起程度、颜色

三、菌种鉴定

1.原理：分解尿素的细菌合成的脲酶将尿素分解为氨，使培养基的碱性增强。

2．方法：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌，若指示剂变红，可初步鉴定该种细菌能够分解尿素。

四、操作提示

1．取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。

2．应在火焰旁称取土壤10g。将称好的土样倒入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，塞好棉塞。3．在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行。

4．实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。

5.

在研究未知微生物时务必规范操作，以防被致病微生物感染，实验后一定要洗手。

五、课题延伸

1．对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助

的方法。

2．在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的

将尿素分解成了氨。氨会使培养基的PH

。因此，我们可以通过检测培养基

pH

变化来判断该化学反应是否发生。

3．在以尿素为唯一氮源的培养基中加入

指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变

，说明该细菌能够分解尿素。