课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数ppt课件配套教案内容

课题2

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

罗凤 涪陵实验中学

一、教材分析

《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》是继微生物的实验室培养技术讲解之后开展的课题，目的是为了让学生研究培养基对微生物的选择作用，并且学会对微生物数量测定的方法。

二、设计思想

《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》的研究思路包括三个方面：（一）筛选菌株：本课题提供的选择培养基的配方中，尿素是培养基中唯一的氮源，因此，原则上只能有能够利用尿素的微生物才能够生长，但实际上，微生物的培养是一个非常复杂的问题，有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物生长繁殖。因此能够在选择培养基上生长的微生物不一定是所需要的微生物，还需要进一步的验证。（二）统计菌落数目：理论依据：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌。（三）设置对照：为了让实验更具有说服力，对照的设置是必不可少的。

通过以上三个方面的探究学习，让学生初步掌握土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的方法。

三、重点难点

教学重点：对土样的选取和选择培养基的配置

教学难点：对分解尿素的细菌的计数

四、教学目标

1.研究筛选微生物的原理

2.从土壤中分离出能够分解尿素的细菌

3.对微生物的数量进行测定

4.对培养结果进行分析与评价

五、教学过程

教学

环节

介绍课题背景引入

新课

研究思路

：（一）

筛选菌种

【展示资料】

尿素最初是从人的尿液中发现的，也是人工合成的第一个有机物，广泛的存在于自然界，尿素是一种中性化肥，对土壤没有影响，适用于各种土壤和植物，是重要的农业N肥，尿素再土壤中并不能直接被植物吸收，必修经过土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸收利用。细菌能分解尿素是因为它们能合成脲酶。

【教师讲解】

1.实例：寻找耐高温的DNA聚合酶

PCR技术：要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶

筛选原因: 因为热泉的高温条件淘汰了绝大多数微生物，使耐热的Taq细菌保留下来

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【分析实例】

让学生先

了解思路

【阅读教材】

引出新课

教师引导

学生活动

设计意图

（二）

微生物计数

(三)设计对照实验

实验设计

启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的需求，到相应的环境中去寻找。

2.筛选原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、

温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。

1.显微镜直接计数法

利用血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。

计算公式：每毫升原液含有菌株=400 ×10000 ×每小格平均菌株数×稀释倍数

提问：显微镜计数的缺点？

2.稀释涂布平板法

⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。

⑵计算：每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M P22 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。

(3)注意事项：①选择菌落数在30～300的平板上计数。

②需培养计算出三个或三个以上的平板菌落求平均数。

③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。

目的：排除实验组中非测试因素对试验结果的影响，提高实验结果的可信度。

[一]土壤取样--[二]制备培养基--[三]样品的稀释与涂布--[四]微生物的培养与观察--[五]菌落计数

最后：结果分析与评价

问题1.培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落？

【学生回答】

1：对照的培养皿无菌落说明培养基没有污染。牛肉膏培养基的菌落数目明显大于选择培养基的菌落数目，说明选择培

通过教师的层层引导，师生分析共同讨论总结实验流程。

【学生讨论总结】

缺点：不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；

需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察；

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问题2.获得某一稀释度下，菌落数30～300的平板，在这一稀释度下是否至少有两个平板的菌落数相接近？

【归纳小结】

课堂

小结

巩固

提高

【组织课堂练习】

养基已筛选出一些菌落。

2.相接近，说明操作成功。

【归纳总结】 【完成练习】

（一）筛选菌株

（二）统计菌落数目

（三）设置对照

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