课题3　分解纤维素的微生物的分离第二课时 公开课

专题二 课题3 分解纤维素的微生物的分离

一、纤维素与纤维素酶

1.纤维素：是一种多糖，由________三种元素组成。_____是自然界中纤维素含量最高的天然产物。

2、纤维素酶：

(1)组成：一种复合酶，至少包括___________ 、 ___________ 、 __________三种组分。前两种酶使__________分解成_____________，第三种酶将____________分解成__________。

(2)作用：

二、纤维素分解菌的筛选

1.两种刚果红染色法的比较：

优点

缺点

方法一

先__________，再加入_______进行颜色反应

显示出的颜色基本上是纤维素分解菌的作用

操作繁琐，加入刚果红会使菌落之间发生混杂

方法二

在_________时就加入刚果红

操作简便，不存在菌落的混杂问题

①由于产生淀粉酶的微生物也形成透明圈，所以可能产生假阳性反应。

②有些微生物具有降解色素的能力，他们在培养过程中也会形成明显的透明圈，与纤维素的分解菌不易区分。

2、筛选方法的原理：

_______是一种染料，它可以与________形成_____________，但并不和纤维二糖、葡萄糖发生这种反应。当纤维素被______________分解后刚果红—纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以___________分解为中心的__________。这样我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。

3.筛选

步骤：土壤取样→选择培养→梯度稀释→将样品涂布到___________________的培养基上→挑选产生__________的菌落。

(1)土壤取样 环境：选择______________的环境。

(2)选择培养 目的：_____纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离所需要的微生物。

选择培养基的配方:

1

成分及含量

纤维素粉（5g）

NaNO3 （1g）

Na2HPO4．7H2O （1.2g）

KH2PO4 （0.9g）

MgSO4．7H2O （0.5g）

KCl （0.5g）

酵母膏

（0.5g）

水解酪素

（0.5g）

作用

提供_______

提供_______

提供_______

提供_______、_______

将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至1000mL

纤维素分解菌的选择培养基配方

a．该培养基是_______(液体或固体)培养基，判断理由是__________________。

b．这个培养基对微生物_____（是或否）具有选择作用。如果具有，是如何进行

选择的?___________________________________________________________ c．你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用。

答：_____________________________________________。

思考：为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物？

答：在选择培养的条件下，可以使________________________________的微生物得到_______________，而那些______________________________的微生物的_________________，因此可以起到“浓缩”的作用。

(3)鉴别培养基

成分及含量

CMC-Na （5～10g）

酵母膏

（1g）

KH2PO4 （0.25g）

琼脂

（15g）

土豆汁

（100mL）

染色

提供_______

提供_______

定型

提供_______

作用

将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至1000mL

纤维素分解菌的鉴别培养基配方

例1、（多选）下列关于刚果红染料的叙述中，错误的是

．．A．刚果红能与纤维二糖、葡萄糖及纤维素等糖类形成红色复合物

B．加入刚果红的目的是为了杀死其他杂菌，富集纤维素分解菌

C．在刚果红培养基上形成的透明圈部位才含纤维素

D．在刚果红培养基上形成的有透明圈的菌落为纤维素分解菌菌落

例2、下列对刚果红染色法的叙述，不正确的是

．．．

2

A．可以先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应 B．可以在倒平板时就加入刚果红 C. 既可以先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，也可以在倒平板时就加入刚果红 D. 可以将刚果红与培养基中其他物质一起放入培养基后再灭菌倒平板

★基础训练1.在分解纤维素的微生物的分离实验中，关于选择培养目的叙述正确的是

A．可以增加纤维素分解菌的浓度 B．可以减少纤维素分解菌的浓度

C．所用培养基是固体培养基 D．所用培养基是平板培养基

2.刚果红能与哪项物质形成红色复合物

A．纤维二糖 B．纤维素 C．葡萄糖 D．麦芽糖

3.纤维素酶的测定方法一般是

A．对纤维素进行定量测定

B．对纤维素酶分解纤维素后所产生的葡萄糖进行定量测定

C．对纤维素酶分解纤维素后所产生的纤维二糖进行定量测定

D．对纤维素分解菌进行定量测定

4.下列操作需要在火焰旁进行的一组是

①土壤取样 ②称取土壤 ③稀释土壤溶液 ④涂布平板 ⑤微生物的培养

A．①②③④⑤ B．②③④⑤④⑤ C．③④⑤ D．②③④

5.下列培养基配方中，能作为选择培养基、鉴别培养基的依次是：

A．②③ B．③① C．②④ D．①④

原料

①

②

③

④

6.下列关于统计菌落数目的方法的叙述，蛋白胨

10g 10g 10g 10g 不正确的是

．．．乳糖

5g 5g 5g 5g A．采用平板计数法获得的菌落数往往少蔗糖

5g 5g 5g 5g 于实际的活菌数 K2HPO4

2g 2g 2g 2g B．当样品的稀释度足够高时，一个活 伊红

0.4g

菌会形成一个菌落

美蓝

0.065g

C．为了保证结果准确，一般采用密度

琼脂

10g 20g

较大的平板进行计数

NaCl

20g

D．在某一浓度下涂布三个平板，若三

蒸馏水（mL）

1000 1000 1000 1000 个平板统计的菌落数差别不大，则

应以它们的平均值作为统计结果

7.将细菌放在固体培养基上培养，它会繁殖并形成菌落（如下图）。某实验小组想检验两种抗生素的杀菌作用，下列哪个实验方案最合适 C

8.在分离纤维素分解菌过程中往往需要震荡，其作用不包括

A．使细菌能与培养基混合均匀 B．使细菌能充分吸收氧气

C．使细菌能快速繁殖 D．防止细菌失水

9.分离纤维素分解菌的实验过程中操作有误的是

．．

3

A．经选择培养后将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 B．富集培养这一步可省略，但培养纤维素分解菌少

C．经稀释培养后，用刚果红染色

D．对照组可用同样量的培养液涂布到不含纤维素的培养基上

10.

苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所示，①为土壤样品。请回答下列问题：

（1）②中培养目的菌株的选择培养基中应加入 作为碳源，②中不同浓度碳源

的培养基

（A．影响；B．不影响）细菌的数量，如果要测定②中活细菌数量，

常采用 法。

（2）④为对照，微生物在④中不生长，在⑤中生长，④与⑤培养基的主要区别在

于

；使用 法可以在⑥上获得单

菌落。采用固体平板培养细菌时进行倒置培养的原因

是： 。

11、（2013年全国新课标Ⅱ卷，39）[生物——选修1：生物技术实践]

临床试用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题：

（1）为了从样本中获取致病菌菌落，可用_______法或_________法将样本借种于固体

培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。

（2）取该单菌落适当稀释，用______法接种于固体培养基表面，在37℃培养箱中培养

24h，使其均匀生长，布满平板。

（3）为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A，B，C，D四种抗生素的

滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现

透明圈，说明该致病菌对抗生素A___________；含B的滤纸片周围没有出现透明

圈，说明该致病菌对抗生素B_________；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，

说明___________________________；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，

且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D

的_____________________。

（4）根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选择抗生素_______。

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