课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优秀教案范文

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

一、筛选菌株

1.自然界中目的菌株筛选的依据:根据它生存环境_________的要求,到相应的环境中去寻找目的菌株。

2.实验室中微生物筛选的原理:人为提供有利于__________生长的条件(包括营养、温度、pH等),同时_____或_____ 其他微生物生长。

3.筛选分解尿素的细菌:在选择培养基的配方中,把尿素作为培

养基中的唯一_____,原则上只有能够利用_____的微生物才能够生长。

筛选菌株——选择培养基

1.目的:从众多的微生物中分离所需要的微生物。

2.

三种筛选方法的特点及举例: 方

法

特

点

举

例

一

利用营养缺陷型选择培养基进行的选择培养

二

利用某种化学物质进行的选择培养

通过控制培养基的营养成分,使营养缺陷型微生物不能正常生长

在完全培养基中加入某些化学物质,利用加入的化学物质对微生物产生的影响,抑制某些微生物,同时选择所需的微生物

改变微生物的培养条件

缺乏氮源时可以分离固氮微生物

加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌

三

利用培养条件进行的选择培养

将培养基放在高温环境中培养可以得到耐高温的微生物

二、统计菌落数目 1.常用方法:_________法。

2.统计依据:当样品的_______足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个_____。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。

3.操作: (1)设置重复组,增强实验的说服力与准确性。

(2)为保证结果准确,一般选择菌株数在____ ____的平板进行计数。

4.计算公式:每克样品中的菌株数=(C÷V)×M,其中C代表某一稀释度下平板上生长的___________,V代表涂布平板时所用的_____________,M代表_________。

二、微生物的计数、结果分析及菌种鉴定

1.微生物的计数:常用的微生物的计数方法有直接计数法和间接计数法。

二者比较如下: 内

容

直接计数法

间接计数法

主要用具

显微镜、血细胞计数板

涂布器

计数依据

细菌个数

培养基上菌落数

优点

计数方便、操作简单

计数的是活菌

缺点

不能区分死菌与活菌

操作较复杂,且有一定误差

计算公式

每毫升原液含菌株数=400×1 000×每毫升原液含菌株数

每小格平均菌株数×稀释倍数

=

2.实验结果分析: 内

容

有无杂菌污染的判断

现

象

结

论

对照的培养皿中无菌落生长

未被杂菌污染

培养基中菌落数偏高

被杂菌污染

菌落形态多样,菌落数偏高

培养基中混入其他杂菌

牛肉膏蛋白胨培养基上的菌选择培养基具有筛选作落数目大于选择培养基上的用

数目

得到3个或3个以上菌落数目操作成功

在30～300的平板

若选取同一种土样,统计结果应接近

选择培养基的筛选作用

样品的稀释操作

重复组的结果

三、设置对照

1.对照实验:是指除了___________以外,其他条件都相同的实验。

2.主要目的:排除实验组中___________对实验结果的影响,提高实验结果的可信度。例如,为了确认培养基是否被杂菌污染,需以不进行接种的培养基培养作为空白对照。

四、实验设计

1.土壤取样: (1)取样原因:土壤中的微生物,数量_____,种类_____。

(2)土壤要求:富含_______,pH 接近_____且潮湿。

(3)取样部位:距地表约________的土壤层。

2.样品的稀释: (1)稀释原因:样品的_________直接影响平板上生长的_________。

(2)稀释标准:选用一定稀释范围的样品液进行培养,保证获得菌

落数在______,便于计数。

3.微生物的培养与观察: (1)培养:根据不同微生物的需要,控制适宜的培养_____和培养时间。

(2)观察。

①观察方法:每隔24 h统计一次菌落数目,最后选取菌落数目稳定时的记录作为结果。

②菌落的特征:包括菌落的_____、_____、隆起程度和_____等。

五、操作提示

1.无菌操作: (1)取土样的用具在使用前都需要_____。

(2)实验操作均应在_______进行。

2.做好标记:本实验使用的平板和试管比较多,为避免混淆,使用前应标明培养基的_____、_________以及平板上培养样品_______等。

3.制定计划:对于耗时较长的生物实验,要事先制定计划,以便提高_________。

4.菌种鉴定: (1)方法:在以_____为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养分解尿素的细菌。

(2)原理: