课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数名师教学设计1

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

教学目标：

1、了解土壤中分解尿素的细菌的分离的原理与实验设计思维

2、了解选择培养基的一般性知识

3、了解微生物计数的一般性知识

4、学会土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的实验设计与操作

教学重点：

1、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的原理

2、选择培培养基的相关知识

3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的实验设计与操作注意事项

教学难点：

1、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的原理

2、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的实验设计与操作注意事项

教学课时

第1课时

教学方法：

PPT展示，讲解，学生自主讨论，阅读法等

教学过程：

一、土壤中分解尿素的细菌的原理与分离讲解：

Ⅰ、原理：

1、尿素[CO(NH2)2]——重要的农业氮肥。只能被土壤中细菌分解为 才能被植物吸收利用。

2、尿素分解的化学方程式： 。

3、土壤中分解尿素的细菌的原理分析（学生阅读教材并回答）：

Ⅱ、分离解尿素的细菌分研究思路：

①寻找微生物：

美国科学家布鲁克（1966年）--在美国黄石公园的一个热泉中发现耐热细菌。这说明寻找菌株要到期相应的 中寻找。

②

筛选原理：

要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等，采用 的方法，或抑制使大多数微生物不能生长，或造成有利于该菌生长的环境，经过一定时间培养后使该菌在群落中的数量上升，再通过平板稀释等方法对它进行纯培养分离。

实例：分解尿素的细菌的分离与计数：

筛选菌株的培养基

KH2PO4 1.4g NaHPO4 2.1g MgSO4 H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。

思考： 碳源： 氮源： 2、此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？

，只有产生脲酶的细菌才能利用 作为氮源而生存。

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二、统计菌落数目：

1、活体计数法----

（1）操作方法：稀释涂布平板

→

统计菌落数。

（2）原理：1个菌落→1个活菌。

（3）统计原则

①、选 个菌落的平板统计。

②、每个稀释度取 个平板取其平均值。

（4）统计结果：统计的菌落数往往比活菌的实际数目 ，因为当 连在一起时，平板上观察到

个菌落。因此统计结果一般用

表示。

每克样品中的菌株数= 。（C:某一稀释度下平板上生长的平均菌落数； V:所用稀释液的体积； M:稀释倍数。）

2、显微镜直接计数

三、设置对照

1、设置对照的目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。

2、对照实验是指除了 的条件外，其他条件都 的实验。满足该条件的称为 ，未满足该条件的称为 组。

实验组：

配制土壤溶液

系列稀释

涂布平板与培养

菌落计数

对照组：设置对照 ---- 同等条件下，培养空白培养基。

四、实验设计与操作

（一）土壤取样

1、土壤是天然培养基 ---- 其微生物数量 、种类 。

2、土壤取样：

（1）取样的位置：土壤中70∼90％是细菌。在富含有机质的土壤层的3∼8cm处中分布着绝大多数的细菌。

（2）取样要求：铲去表层土。

（1）、测细菌数：一般用10、10、10稀释液。

（二）样品稀释

（2）、测放线菌：一般用10、10、10稀释液。原则：确保平板上的菌落数在 之间。

（3）、测真菌数：一般用10、10、10稀释液。

1、接种：用适当的稀释液作涂布平板

2、培养：细 菌：30∼37℃，1∼2d；

（三）微生物的培养与观察 放线菌: 25∼28℃, 5∼7d；

霉 菌: 25∼28℃, 3∼4d。

3、观察：

a. 每24h统计一次菌落数目。

原因：不同种类的微生物，往往需不同的培养温度和培养时间，每隔24h统计1次菌落数目，选取菌落数目稳定时记录作为结果，这样可以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。

234345456b. 以“稳定菌落”为观察对象。原因：不同种类的细菌形成的菌落，在大小、形状、光泽度、颜2

色、硬度、透明度等方面具有一度的特征，菌落特征可作为菌种鉴定的重要依据。

五、鉴定

：

酚红鉴别培养基：鉴定分解尿素的细菌。

原理：脲酶催化尿素分解成氨→

培养基碱性增强→

酚红变红→

结论：该细菌能分解尿素。

试题分析：

例1：土壤中的细菌能分解尿素，是因为它们能合成一种(

) A．尿素酶 B．脲酶 C．蛋白酶 D．肽酶

例2：在培养基中加入尿素(惟一氮源)，以分离出能分解尿素的细菌，这种加入尿素的培养基在功能上属于(

) A．选择培养基 B．固体培养基 C．液体培养基 D．半固体培养基 例3：实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效应，用3种细菌在事先准备好的琼脂平板上画3条等长的平行线(3条线均与图中的链霉素带接触)，将平板置于37 ℃条件下恒温培养3天，结果如图所示。从实验结果分析，以下叙述不正确的是(

) ．A．链霉素能阻止结核菌的生长

B．链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效

C．链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效

D．链霉素可以用于治疗伤寒病人

例4：测定土壤中细菌数量一般选用10、10和10倍的稀释液进行平板培养，而测定真菌的数量一般选用10、10和10倍稀释，其原因是(

) A．细菌个体小，真菌个体大 B．细菌易稀释，真菌不易稀释

C．细菌在土壤中数量比真菌多 D．随机的，没有原因

例5：用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是(

) A．未接种的选择培养基 B．未接种的牛肉膏蛋白胨培养基

C．接种了的牛肉膏蛋白胨培养基 D．接种了的选择培养基

例6：通常用来作为菌种鉴定的重要依据是(

) A．菌落 B．细菌形态 C．细菌体积 D．细菌结构

例7：下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是(

) A．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水

B．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、琼脂、水

C．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、琼脂、水

D．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水

例8：在涂布平板操作时错误的是(

) A．将涂布器在酒精灯火焰上灼烧，直到烧红 B．取少量菌液滴加在培养基表面

C．将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃待酒精燃尽后，冷却8 s～10 s再用

D．涂布时可转动培养皿，使涂布均匀

例9：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养能分解尿素的细菌后，指示剂的颜色是(

)

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A．蓝色 B．红色 C．黑色 D．棕色

例10：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时又能抑制或者阻止其他种类微生物生长的培养基称做(

) A．鉴别培养基 B．加富培养基 C．选择培养基 D．基础培养基

例11：分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是(

) ①加尿素

②不加尿素

③加琼脂

④不加琼脂

⑤加葡萄糖

⑥不加葡萄糖

⑦加硝酸盐

⑧不加硝酸盐

A．①③⑤⑦ B．②④⑥⑧ C．①③⑤⑧ D．①④⑥⑦

例12：在寻找目的菌株时，要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找，下列不属于厌氧细菌．生存环境的是(

) A．土壤深层 B．人或动物体内寄生 C．真空 D．池塘淤泥

例13：下列是关于检测土壤中细菌总数实验操作的叙述，其中错误的是(

) A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板

B．取10、10、10倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上

C．将实验组和对照组平板倒置，37 ℃恒温培养24～48小时

D．确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数

例14：可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是(

) A．以尿素为惟一氮源的培养基中加入二苯胺试剂 B．以尿素为惟一氮源的培养基中加入酚红指示剂

C．以尿素为惟一氮源的培养基中加入苏丹Ⅲ试剂 D．以尿素为惟一氮源的培养基中加入双缩脲试剂

例15：在做土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验时，甲组实验用氮源只含尿素的培养基，乙组实验用氮源除尿素外还含硝酸盐的培养基，其他成分都相同，在相同条件下操作，培养与观察，则乙组实验属于(

) A．空白对照 B．标准对照 C．相互对照 D．条件对照

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