复习与测试公开课教案（教学设计）

课题3 分解纤维素的微生物的分离

一、基础知识

1、纤维素是一种由 首尾相连而成的高分子化合物， 是纤维素含量最高的天然产物。

2、纤维素酶是一种

酶，它至少包括三种组分（即 ， ， ）的协同作用，前两种酶使纤维素分解为 ，第三种酶将 分解为 。

3、纤维素分解菌的筛选方法是利用 。

4、刚果红染色法的原理：刚果红是一种染料，它可以与纤维素形成 ，但并不和 、

发生这种反应。当纤维素被纤维素酶分解后刚果红—纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的 ，这样我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。

二、实验操作

1、分离分解纤维素的微生物实验流程：

土壤取样→ →梯度稀释→ → 2、选取富含 的土壤样品（其中纤维素分解菌相对较多）。

3、选择培养：选择培养的目的是增加 ，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物，该过程使用液体的选择培养基培养。将土样加入装有30ml选择培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下震荡培养1～2天，直至培养液变浑浊，重复选择培养。

1 4、梯度稀释：按照课题1的稀释操作方法，将选择培养后的培养基进行等比稀释10～710倍。

5、将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上：制备培养基、倒平板操作、涂布平板46（将稀释度为10～10的菌悬液各取0.1ml涂布到 的平板培养基（含有刚果红的固体培养基）上，30℃倒置培养，菌落周围会出现明显的透明圈，透明圈越大说明分解能力越强）。

选择性培养基是指根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养

基，有利于目的微生物生长，而抑制其他微生物生长，从而选择出所需微生物。

鉴别性培养基是在培养基中加入能与目的菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂，从而达到鉴别

该微生物有无及数量的培养基，一般用于鉴定不同微生物。

6、挑选产生透明圈的菌落（采用刚果红染色法，挑选产生透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。）

7、刚果红染色法：方法一是先 ，再加入刚果红进行颜色反应。方法二是在

时就加入刚果红。结果在 的菌落周围将出现明显的 。

8、分解纤维素的微生物的分离只是进行了初步筛选，是分离纯化的第一步，实验完成后为确定得到的是纤维素分解菌，还需要进行

实验，产纤维素酶的

发酵方法有两种：即

、

。纤维素酶的测定方法一般采用分解滤纸等纤维素后产生的葡萄糖进行定量的测定。

〖旁栏思考题〗1、本实验的流程与课题2中的实验流程有哪些异同？

课题2是将土样制成的菌悬液直接涂布在以尿素为唯一氮源的选择性培养基上，直接分离得到菌落。本课题通过选择培养，使纤维素分解菌得到增殖后，再将菌液涂布在选择培养基上。其他步骤基本一致。

2、取样的环境是怎样的，作出这种选择的理由是什么？

选择富含纤维素的环境，如树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等等。根据生物与环境的互相依存关系，在富含纤维素的环境中纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土壤中获得目的微生物的几率要高于普通环境。

3、将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应该埋进土壤多深？

将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对聚集，实际上是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境。一般应将纸埋于深约10cm左右腐殖土壤中。

4、为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物？

在选择培养的条件下，可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“浓缩”的作用

5、刚果红染色法的两种方法各有哪些优点与不足？

方法一：缺点是操作烦琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂；优点是这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用。

方法二：优点是操作简便，不存在菌落混杂问题。缺点一是由于培养基中还含有淀粉类物质，可以使能产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应；缺点二有些微生物具有降解色素的能力，它们在长时间培养过程中会降解刚果红，形成明显的透明圈，与纤维素分解菌不易区分。