课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教案范文

课题2

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

【教材内容解读】

要点 1 筛选菌株

（1）实验室中微生物的筛选应用的原理

人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。

（2）选择性培养基

在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。

（3）配制选择培养基的依据

根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质或不加入某种物质已达到选择的目的。例如，培养基中不加入有机物可以选择培养自养微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培养能固氮的微生物；加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。

要点 2 统计菌落数目

（1）测定微生物数量的常用方法有稀释涂布平板法和显微镜直接计数。

（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理

当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般设置3～5个平板，选择菌落数在30～300的平板进行计数，并取平均值。统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。

要点 3 设置对照

设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。

要点 4 实验设计

实验设计包括对实验方案，所需仪器、材料、用具和药品，具体的实施步骤以及时间安排等的综合考虑和安排。

（1）土壤取样

从富含有机物、潮湿、pH≈7的土壤中取样。铲去表层土，在距地表约3～8cm的土壤层取样。

（2）制备培养基

准备选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基。牛肉膏蛋白胨培养基作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。

（3）微生物的培养与观察

将土样以10、101、102……依次等比稀释至107稀释度，按照浓度从低到高的顺序涂布平板，不必更换移液管。注明培养基种类、培养日期以及平板上培养样品的稀释度。将涂布好的培养皿放在30℃温度下培养。随着培养时间的延长，会有不同的菌落产生。比较牛肉膏培养基和选择培养基中菌落的数量、形态等，并做好记录。

（4）细菌的计数：

当菌落数目稳定时，进行计数，防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。求出平均值，根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。

要点5

疑难解答

（1）如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数?

统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的平均值，[来源学科网][来源学+科+网][来源:学*科*网][来源学_科_网Z_X_X_K]

然后按课本旁栏的公式进行计算。

（2）为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度?测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗? 这是因为土壤中各类微生物的数量是不同的，因此，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。

【典型例题解析】[来源:学,科,网][来源:学。科。网Z。X。X。K]

【例1】分析下面培养基的配方：KH2PO4、Na2HPO4、MgS04·7 H2O、葡萄糖、尿素、琼脂。请回答：

(1)在该培养的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是_______和______。

(2)想一想这种培养基对微生物是否具有选择作用?如果具有，又是如何进行选择的? 【分析】碳源是提供碳元素的物质，氮源是提供氮元素的物质。所以碳源是葡萄糖，氮源是尿素。绝大多数生物都能利用葡萄糖，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，所以这中培养基对微生物有选择作用。选择的原则是只有能够利用尿素的微生物才能够生长。

【答案】(1)葡萄糖 尿素 (2)有选择作用。因为此配方中尿素是唯一氮源，因此，只有能够利用尿素的微生物才能够生长。

6【例2】用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为10的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是（ ）

A.涂布了一个平板，统计的菌落数是230 B.涂布了两个平板，统计的菌落数分别是215和260，取平均值238 C.涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163 D.涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233 【分析】在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性，所以A、B不正确。C项虽涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另两个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。

【答案】D [来源:Zxxk.Com]【同步训练与拓展】

1.配制培养基的叙述中正确的是（ ）

A.制作固体培养基必须加入琼脂

B.加入青霉素可得到放线菌

C.培养自生固氮菌不必加氮源

D.发酵工程一般用半固体培养基

2. 某一种细菌株要从环境中提取现成的亮氨酸才能生长，此菌株对链霉素敏感。实验者用诱变剂处理此菌株，想筛选出表中细菌菌株类型。根据实验目的，选用的培养基类型是（

）

注：Ｌ（亮氨酸）

Ｓ（链霉素）

“＋”（加入）

“—”（不加入）

如：Ｌ—：不加亮氨酸

Ｓ＋：加入链霉素

选项

Ａ

Ｂ

Ｃ

Ｄ

筛选出不需要亮氨酸的菌株

Ｌ＋

Ｓ＋[来源:学。科。网]筛选出抗链霉素的菌株

Ｌ—

Ｓ—

Ｌ＋

Ｓ＋

Ｌ＋

Ｓ＋[来源:学*科*网]筛选出不需要亮氨酸的抗链霉素的菌株

Ｌ＋

Ｓ－

Ｌ—

Ｓ＋

Ｌ－

Ｓ—

Ｌ—

Ｓ＋

Ｌ＋

Ｓ—

Ｌ—

Ｓ—

Ｌ＋

Ｓ＋

ｌ—

Ｓ—

3.选择培养土壤中的微生物时，土壤取样应选取什么样的土壤层（ ）

A.表层土

B.距地表约3～8cm的土壤层

C.距地表约lO～20cm的土壤层

D.距地表20cm以下的土壤层

4.为了保证结果准确，一般选择菌落数在_______的平板进行计数 ( ) A.30～100 B.30～200

C.30～300

D.30～600 5.土壤中的细菌能分解尿素，是因为它们能合成 ( ) A.尿素酶 B.脲酶

C.蛋白酶 D.细菌酶

6.设置对照的主要目的是排除实验组中____对实验结果的影响 ( ) A.测试因素 B.非测试因素

C.全部因素 D.部分因素

7.细菌适宜在酸碱度接近______的潮湿土壤中生长 ( ) A.酸性

B.碱性

C.中性

D.强碱性

8.平板菌落计数法的优点是 ( ) A.能粗略测出样品中的活菌数

B.操作简单

C.测定值受各种因素影响小

D.统计的数字精确度高

9.使用选择培养基的目的是 ( )

A.培养细菌

B.培养真菌

C.使需要的微生物大量繁殖

10.在“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验中，关于“选择培养”步骤正确的叙述是（ ）

A.可以增加纤维素分解菌的浓度

B.可以减少纤维素分解菌的浓度

C.所用培养基是固体培养基

D.所用培养基是平板培养基

11.用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是（ ）

A.未接种的选择培养基

B.未接种的牛肉膏蛋白胨培养基

C.接种了的牛肉膏蛋白胨培养基

D.接种了的选择培养基

12.平板菌落计数法是根据微生物在_________________上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的现象进行的，也就是说一个菌落即代表一个_____________。计数时，先将待测样品作一系列稀释，再取一定量的稀释菌液接种到培养皿中，使其均匀分布于平皿中的培养基上，经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计_______________，即可换算出样品中的_____________。

D.表现某生物的特殊性状，与其他微生物加以区别

13.探究如何从土壤中分离自生固氮菌并计数

实验原理：农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比较多。将用表土制成的稀泥浆，接种到无氮培养基上进行培养。在这种情况下，只有自生固氮菌才能生长繁殖。用这种方法，可以将自生固氮菌与其他细菌分离开来。

材料用具：农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、盛9mL无菌水的试管、无菌吸管、无菌涂布器、无菌培养皿、盛95mL无菌水的锥形瓶、恒温箱。

方法步骤：

(1)倒平板

分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒平板，应在________________操作。

(2)制备土壤稀释液

取土样10g加入盛有95mL无菌水的锥形瓶中（约100mL悬浮液），充分摇匀。无菌吸管17吸取上清液1mL，转至9mL的无菌水的大试管中，标记大试管为10，如此依次稀释到10[来源:学|科|网][来源:学*科*网Z*X*X*K]

稀释度。

(3)涂布

73按照由10～10稀释度的顺序分别吸取O.1mL进行平板涂布，每个稀释度下，无氮培养基应至少涂布________个平板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布________个。

(4)培养

连同一个___________的培养皿一起放入恒温箱内。在28～30℃培养3～4d。

(5)细菌的计数

5当菌落数目稳定时，选取菌落数在____________的平板进行计数。如果稀释度是10的培养基计数的菌落平均值为50，则每克样品中的菌落数是_________。

预期结果：

相同稀释度下，牛肉膏蛋白胨平板上的菌落数____________(填“多于"或“少于”)无氮培养基上的数目。说明原因：______________________________________________ ______________________________________________________________________。

答案