课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数板书设计及设计说明

2.2

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

一、【学习目标】

1.说出培养基对微生物的选择作用，理解并记忆进行微生物数量的测定的方法；

2.记忆利用选择培养基分离细菌的详细步骤

二、【学习重难点】 1.分离细菌的详细步骤；2.微生物数量的测定方法。

三、【学习方法】 自主学习法、小组探究法

四、【教学过程】

（一）研究思路

1.【基础知识】（记忆）阅读教材，完成基础知识部分。

1．1筛选菌株

(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于 生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时 或 其他微生物生长。 (2)选择培养基：在微生物学中，将允许 种类的微生物生长，同时 和 其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。

（3）配制选择培养基的依据

根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。例如，培养基中不加入有机物可以选择培养 微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培养 ；的微生物.加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。

1.2．统计菌落数目

（1）测定微生物数量的常用方法有 和 。

（2）稀释涂布平板法统计样品中 的数目的原理

当样品的 足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个 。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板进行计数。此外，测定微生物数量的常用方法还有 直接计数。

1.3．设置对照

设置对照的主要目的是排除实验组中 对实验结果的影响，提高实验结果的 。例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以培养 的培养基作为空白对照。

【开拓视野1】显微镜直接计数

[来源:学#科#网Z#X#X#K]将待测样品与等量的已知红细胞含量的血液混匀后，涂布在载玻片上，经固定染色后，在显微镜下随机选取若干个视野进行计数，得出细菌与红细胞的比例，再根据红细胞的含量计算出单位体积内的细菌数目。也可以用血球计数板直接统计细菌含量。

2.【合作探究】—小组讨论，得出一致结论，并展示小组讨论成果！

【思考1】、筛选菌株的培养基

KH2PO4 1.4g NaHPO4 2.1g

MgSO4 H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。

[来源:学.科.网]

思考：

1、该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？ 碳源： 氮源： 2、此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？ 。

只有产生脲酶的细菌才能利用 作为氮源而生存。

（二）实验设计—阅读教材，完成以下基础知识，初步探究思考问题。

1.【基础知识】（记忆）

关于土壤中某样品细菌的分离与计数实验操作步骤如下：

1． 取样：从肥沃、湿润的土壤中取样。应先 3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的 中。

2．制备 ：准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基

将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显 选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为 ，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。

3．微生物的 与观察

将10g土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为250 mL)，充分摇匀，吸取上清液 ，转移至盛有 的生理盐水的无菌大试管中，将土样以1、101、102……

依次等比稀释至10稀释度，并按照由10～10稀释度的顺序分别吸取 进行平板涂布操作。每个稀释度下需要3个选择培养基、1个牛肉膏蛋白胨培养基。

将涂布好的培养皿放在30℃温度下培养，及时观察和记录。

挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含 培养基的斜面中，观察能否产生如教材中图2-lO的颜色反应。

4．细菌的计数

当菌落数目稳定时，选取菌落数在 的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出 ，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。

5．思考与讨论

（2）为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？

【思考3】统计菌落数目：

[来源:学§科§网]773

（1）如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？

1、活体计数法----稀释涂布平板法

（1）操作方法：稀释涂布平板

→

统计菌落数。

（2）原理：1个菌落→1个活菌。

（3）统计原则

①、选 30∼300 个菌落的平板统计。

②、每个稀释度取3个平板取其平均值。

课堂检测

1.使用选择培养基的目的是（ ）

A.培养细菌

B.培养真菌

C.使需要的微生物大量繁殖

D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别

2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别

A.CO2和N2 B.葡萄糖和NH3

C.CO2和尿素 D.葡萄糖和尿素

3.下列说法不正确的是（ ）

A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶

B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值

C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度

D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。

4.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（

）

A.较多的氮源物质 B.较多的碳源物质 C.青霉素类药物 D.高浓度食盐