课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数说课稿【一等奖】

专题2

课题2：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

一、目标要求：

1、研究培养基对微生物的选择作用。

2、进行微生物数量的测定。

二、自主学习：（学习课本P21-26）

1．尿素只有在微生物合成的

的催化下被分解成

之后，才能被植物吸收利用。

2．在寻找目的菌株时，要根据它对

的要求，到相应的环境中去寻找。

3．实验室中微生物的筛选应用的原理是：人为提供有利于

生长的条件（包括

等），同时抑制或阻止其他微生物生长。

4．选择培养基是指允许

的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。例如：只用

作唯一氮源的培养基可以筛选出能分解尿素的微生物。

5．常用来统计样品中活菌数目的方法是

。即当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的

。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在

的平板进行计数。另外，

也是测定微生物数量的常用方法。

6．一般来说，统计的菌落数往往比活菌的实际数目

。这是因为

。因此，统计结果一般用

而不是活菌数来表示。

7．设置对照实验的主要目的是排除实验组中

对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。

8．对照实验是指除

的条件以外，其他条件都相同的实验，其作用是比照实验组，排除任何其他可能原因的干扰，证明确实是所测试的条件引起相应的结果。

9．实验设计包括对

，所需仪器、材料、用具和药品，

以及时间安排等的综合考虑和安排。

10．不同的微生物需要不同的培养温度和时间，本实验可以每隔24h统计一次菌落数目，选取

时的记录作为结果，这样可以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。

11．做这个实验时，除在实验室培养过程中做好无菌操作以外，还应注意：⑴取土样用的____________和盛土用的__________在使用前都需要灭菌。⑵称取土壤和稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在_____________旁操作。

12．进行多组实验过程中，平板和试管较多，为了避免________，最好在使用前做好标记。

13．结果分析与评价：⑴对照的培养皿在培养过程中

，说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏培养基的菌落数目明显

选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。⑵如果得到了2个或2个以上菌落数目在

个的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。⑶如果选取的是同一种土样，统计的结果应该

。

14．对所需的微生物进行初步筛选，只是分离纯化菌种的第一步，要对分离的菌种进行一步的鉴定，还需要借助

的方法。尿素被分解成氨后，培养基的pH会

，如果在培养基中加入酚红，培养基将变成

色，这样可以初步鉴定该种细菌可以分解尿素。

三、合作交流：

1．如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？

2．比较教材P22中两位同学的操作方法，哪位同学的结果接近真实值？你认为这两位同学的实验需要改进吗？如需要，如何改进？

3．分析教材P23中A同学的结果与其他同学不同的原因最可能是什么？请设计一个实验方案来证明究竟是哪个原因。(简述方案)

4．为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？

这是因为土壤中各类微生物的数量（单位：株/kg）是不同的，例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。因此，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。

四、巩固练习：

1、能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是

（

）

A．CO2和N2

B．葡萄糖和NH3

C．CO2和尿素

D．葡萄糖和尿素

2、用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，操作及结果最好的是

（

）

A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230 B．涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238 C．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和216，取平均值163 D．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是200、220和216，取平均值212 3、某同学将稀释倍数为106的稀释液涂布了三个平板，测得平板上菌落数分别是212、240和250，那么每毫升样品中的菌落数是多少（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml）(

) A．2.34×108

B．2.34×109

C．234

D．23.4

（

）

4、下列不属于菌落特征的是

A．菌落的形状

B．有无荚膜

C．菌落的大小

D．隆起程度

（

）

5、用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是

A．未接种微生物的选择培养基

B．未接种微生物的牛肉膏蛋白胨培养基

D．接种了微生物的选择培养基

（

）

C．接种了微生物的牛肉膏蛋白胨培养基 6、关于培养基满足的条件，下列叙述错误的是

A．培养乳酸菌时需要在培养基中添加维生素 B．培养霉菌时需将培养基的pH调至碱性

C．培养细菌时需将培养基的pH调至中性或微碱性

D．培养厌氧微生物时需要提供无氧的条件

7、牛肉膏主要为微生物提供

A．氮源和维生素

（

）

B．氢元素、氧元素

D．无机盐和水

C．碳源、氮源、磷酸盐和维生素

8、有关稀释涂布平板法，叙述错误的是

A．首先将菌液进行一系列的梯度稀释

（

）

B．然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面

C．其核心是防止杂菌污染，保证培养液的纯度

D．结果都是可在培养基表面形成单个的菌落

9、在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的结果产生原因可能有

（

）

①由于土样不同

②由于培养基被污染

③由于操作失误

④没有设置对照

B．②③④

C．①③④

D．①②④

（

）

A．①②③

10、请选出下列正确的操作顺序

①土壤取样

②称取10g土壤取出加入盛有90ml无菌水的锥形瓶中 0.1ml进行平板涂布

释度

A．①→②→③→④ B．①→③→②→④ C．

①→②→④→③

③分别吸取④依次稀释至10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7稀D．①→④→②→③

11、用稀释涂布平板法统计菌落数目时，为了保证结果准确，下列做法正确的是（

）

A．随机选取1个稀释度的菌液涂布3个平板上，取它们的平均值进行计算。

B．将几个稀释度下的菌液都涂布在平板上，培养后再选择菌落数在30～300的平板进行计数。

C．随机选取3个稀释度的菌液涂在平板上，取它们的平均值进行计算。

D．选最小、最大和中间的3种菌液涂布在平板上，取它们的平均值进行计算。

12、可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是

（

）

A．以尿素为唯一氮源的培养基中加酚红指示剂

胺试剂

C．以尿素为唯一氮源的培养基中加苏丹Ⅲ试剂

脲试剂

B．以尿素为唯一氮源的培养基中加二苯D．以尿素为唯一氮源的培养基中加双缩

13、用稀释涂布平板法来统计样品中活细菌的数目，其结果与实际值相比

A．比实际值高

低

B．比实际值低

C．和实际值一致 （

）

D．比实际值可能高也可能14、测定土壤中细菌的数量一般选104、105和106倍的稀释液进行平板培养；而真菌的数量，一般选用102、103和104倍稀释，其原因是

（

）

B．细菌易稀释真菌不易稀释

A．细菌个体小，真菌个体大

C．细菌在土壤中含量比真菌高 D．随机的，没有原因

15、培养基的制作是否合格的标准：如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2d后

，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。接种操作是否符合无菌要求的标准：如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小

，并符合所接菌种菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的，如果培养基上出现了

，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求。

16、将10ml酵母菌培养液在适宜温度下培养，并于不同时间等量均匀取样4次，分别测定样品中酵母菌的数量和pH值，结果如下。请分析回答：

样品

1 2 3 4 酵母菌数量（个/mm3）

4．8 pH 1210 820 5．4 1210 1000 3．7 5．0

（1）表中样品的取样先后次序为

。

（2）对酵母菌而言，10ml该培养液的环境负荷量为

。

（3）若第五次均匀取样时，样品中的酵母菌数量为760个/mm3，产生这种结果的原因是：

。

17、(12上海)回答下列关于微生物和酶的问题。

高温淀粉酶在大规模工业生产中有很大的实用性。研究者从热泉中筛选了高效产生高温淀粉酶的嗜热菌，其筛选过程如图15所示。

⑴．Ⅰ号培养基称为_____________(按功能分)；该培养基中除了加入淀粉外，还需加入另一种重要的营养成分_____。

A．琼脂

B．葡萄糖

C．硝酸铵

D．碳酸氢钠

⑵．在高温淀粉酶运用到工业生产前，需对该酶的最佳温度范围进行测定。图中的曲线①表示酶在各种温度下酶活性相对最高酶活性的百分比。将酶在不同温度下保温足够长的时间，再在酶活性最高的温度下测其残余酶活性，由此得到的数据为酶的热稳定性数据，即图中的曲线②。根据图中的数据，判断该酶使用的最佳温度范围是______。

A．40℃一50℃

C．60℃一70℃

B．50℃一60℃

D．70℃一80℃

⑶．据图判断下列叙述错误的是______。

A．该酶只能在最佳温度范围内测出活性

B．曲线②35℃数据点是在80℃时测得的

C．曲线①表明80℃是该酶活性最高的温度

D．曲线②表明该酶的热稳定性在70℃之后急剧下降

18、(17湖南) 某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。回答下列

问题：

（1）有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生_______。能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，原因是________________________________，但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是________________________（答出两点即可）。

（2）为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择__________（填“尿素”、“NH4NO3”或“尿素+NH4NO3”）作为氮源，不选择其他两组的原因是________________________。

（3）用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有________________________（答出两点即可）。

P26练习2：反刍动物的瘤胃中含有大量的微生物，其中也包括分解尿素的微生物。由于瘤胃中的微生物多为厌氧菌，接触空气后会死亡，因此分离其中能分解尿素的微生物除了需要准备选择培养基外，还应参照厌氧菌的培养方法进行实验设计。