复习与测试优秀教学设计说课稿

课题

1 微生物的实验室培养

科学基础

：

1在传统发酵技术的应用中，

都利用了微生物的发酵作用，

其中的微生物来自于制作过程

中的自然感染。而在工业化生产中，为了提高发酵的质量，需要获得优良菌种，并保持发酵

菌种的纯度。这就要涉及到微生物的培养、分离、鉴别等基本技术。

2培养基的种类包括固体培养基和液体培养基等。

3培养基的化学成分包括水、无机盐

、碳源

、氮源四类营养成分。培养基除满足微生物生长的pH 、特殊营养物质和氧气

，生长因子等要求。生长因子：某些微生物正常生长代谢过程中必须从培养基中吸收的微量有机小分子，如某些氨基酸、碱基、维生素等。

, 4获得纯净培养物的关键是

防止外来杂菌的入侵

。无菌技术包括：

（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒

；

（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌

；

（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近旁进行；

（4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。

5消毒方法：

（1）日常生活经常用到的是煮沸消毒法；

（2）对一些不耐高温的液体，则使用巴氏消毒法（作简要介绍）

；

（3）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果，然后使用紫外线进行物理消毒。

（4）实验操作者的双手使用酒精进行消毒；

（5）饮水水源用氯气进行消毒。

6灭菌方法：

（1）接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；

（2）玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱

；

（3）培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅

。

（4）表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯

。

目标指向：

一）知识与技能了解有关培养基的基础知识；

掌握培养基的制备、

高压蒸汽灭菌和平板划线法等基本操作技术

二）过程与方法分析实验思路的确定和形成的原因，分析实验流程，对比前面的实验设计，归纳共性，分析差异，增加印象

三）情感、态度与价值观：形成勇于实践、严谨求实的科学态度和科学精神

材料准备：

蒸馏水，琼脂，牛肉膏，蛋白胨，NaCL等，大肠杆菌菌种。

用具选择：

天平，试管若干，试管架若干，涂布器，培养皿若干，火柴，酒精灯，接种环，高压蒸汽灭菌锅，干热灭菌箱，玻璃棒，牛皮纸，称量纸，旧报纸，锥形瓶若干，棉塞若干等。

探究思路：

1 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基：

1 ）计算：根据配方比例，计算

100mL 培养基各成分用量。

2 ）称量：准确称取各成分。称取牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速，目的是防止牛肉膏

吸收空气中水分。

3 ）溶化：①加水加热熔化牛肉膏；②加入蛋白胨和氯化钠继续加热；③加入琼脂；

④用蒸馏水定容到

100mL。整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。

4 ）调节pH：用

1mol/LNaOH 溶液调节

pH 至偏碱性。

5 ）灭菌：将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加塞包扎后用高压蒸汽灭菌锅灭菌；

所用培养皿用报纸包扎后用干热灭菌箱灭菌。

6 ）倒平板：待培养基冷却至

50℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。

其过程是：

①

在火焰旁右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞；

②

右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰；

③

左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖。

④

待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。

2 接种：（纯化大肠杆菌）

1 ）微生物接种的最常用方法是平板划线法和稀释涂布法，另外还有穿刺接种和斜面接

种等。

2 ）平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐

步稀释分散到培养基表面。其操作步骤是：

①将接种环在酒精灯火焰上灼烧直至烧红。

②在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。

③将菌种试管口通过火焰达到消灭试管口杂菌的目的。

④将冷却的接种环伸入到菌液中取出一环菌种。

⑤

将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。

⑥

将皿盖打开一条缝隙，把接种环伸入平板内划

3～5 条平行线，盖上皿盖，不要划破

培养基。

⑦灼烧接种环，冷却后从第一区划线末端开始向第二区域内划线。重复上述过程，完成

三、四、五区域内划线。注意不要将第五区的划线与第一区划线相连。

⑧将平板倒置放在培养箱中培养。

3 ）稀释涂布平板法：将菌液进行一系列梯度稀释，并将不同稀释度菌液分别涂

布到琼脂固体培养基上进行培养。

当稀释倍数足够高时，

即可获得单个细菌形成的标准菌落。

①稀释操作：1、将分别盛有9ml水的6支试管灭菌，并按10^1到10^6的顺序进行编号。2、用移液试管吸取1ml培养的菌夜，注入10^1倍稀释的试管中。用手指轻压移夜管上的橡皮，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。3、从10^1倍稀释的试管中吸取1ml稀释液，注入10^2倍稀释的试管中，重复第二步的混匀操作。以此类推，直到完成最后一支试管的稀释。注意：移夜管需要经过灭菌。操作时，试管口和移夜管应在离火焰1~2cm处

②涂布操作：1、将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。2、取少量菌夜（不超过0.1ml）滴加到培养基表面。3、将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8~10s。4、用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面，涂布时可转动培养皿，使菌液分布均匀。

注意：1.将涂布器末端浸在盛有体积分数为百分之七十的酒精的烧杯中。取出时，要让多余

的酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。

4）将接种后的培养基和议和未接种的培养基都放在37度恒温箱中，培养12H和24H，分别观察记录结果。

结果与讨论：

1思考与讨论：

（1）关于对上述“探究思路”方面：

1）

琼脂是从红藻中提取的多糖

，在配制培养基中用作为凝固剂

。

2）

从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？细胞的基本元素，约占原生质总量的

97％以上。

3）

牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供糖

、

维生素和有机氮等营养物质。

4）

培养乳酸杆菌时需要添加维生素，培养霉菌时需要将培养基pH调节为酸性

，培养细菌时需要将pH调节为中性或微碱性

。

5）

无菌技术除了防止培养物被污染外

，还具有的目的是防止感染实验操作者

。

6）对接种环灭菌时要用酒精灯的充分燃烧层火焰灼烧可能伸入试管或培养皿的部位。

7）利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是避免妨碍热空气流通。

8）物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是有利于锅内温度升高

；随后关闭排气阀继续加热，气压升至

100k Pa，温度121℃

，并维持15～30 min；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至零时打开锅盖，其目的是防止容器中的液体暴沸

。

（2）关于探究思路2方面：

1）锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是消灭瓶口的杂菌，防止杂菌感染培养基。

2）倒平板的目的是防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。

3）若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？

不能。空气中杂菌会在这些粘附培养基上繁殖，并污染皿内培养基。

4）配制斜面培养基中，试管要加塞棉塞的目的是保持通气并防止杂菌感染。

5）试管培养基形成斜面的作用是增大接种面积。

6）取菌种前灼烧接种环的目的是消灭接种环上的微生物；除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环的目的是消灭接种环上残留菌种；

取菌种和划线前都要求接种环冷

却后进行，

其目的是防止高温杀死菌种；

最后灼烧接种环的目的是防止细菌污染环境和操作者。

7）在第

1 次划线后都从上次划线末端开始的目的是获得由单个细菌形成的标准

菌落。

8）操作中试管口和移液管应在离火焰

1～2cm 处。整个操作过程中使用了

1 支

移液管。

9）在某培养基上出现了3种特征不同的菌落，原因有培养基灭菌不彻底或杂菌感染等。

10）培养12h 和24h后的菌落大小不同（相同、不同）

；菌落分布位置相同（相同、

不同）

。原因是时间越长，菌落中细菌繁殖越多，菌落体积越大；菌落的位置不动，但菌落

数增多。

11）未接种的培养基表面是否有菌落生长？如有，说明什么？

12）在接种大肠杆菌的培养基上，是否观察到到了独立的菌落？他们的颜色形状大小相似否？

13）如果在培养基上观察到不同形态的菌落，能分析出可能的原因引起的吗？

2 总结：

深入思辨：

菌种保藏：频繁使用的菌种利用临时保藏法保存，长期保存菌种的方法是甘油管藏法。

前者利用固体斜面培养基培养后，保存在

4℃冰箱中，每

3～6 个月转种培养一次，缺点是

保存时间较短，

容易发生污染和变异；

后者将菌种与无菌甘油体积等量混合均匀后保存在－20℃冷冻

箱中。