课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优质课教案

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

★课题重点

对土样的选取和选择培养基的配制

★课题难点

对分解尿素的细菌的计数

★教学方法

启发式教学

★教学工具

多媒体课件

★教学过程

（一）引入新课

上节课我们学习了培养基的配置以及接种技术。下面我们来学习如何进行细菌的分离，获得所需要的目的微生物。

（二）进行新课

1．基础知识

1．1 尿素是一种重要的氮肥，农作物

（能，不能）直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为

，这是因为细菌能合成

。

1．2 科学家能从热泉中把耐热细菌筛选出来是因为

，这样也适用于实验室中微生物的筛选，原理是

。

点评：生物适应一定环境，环境对生物具有选择作用。所以通过配制选择培养基、控制培养条件等选择目的微生物。

〖思考1〗在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是

，提供氮源的的是

，琼脂的作用是

。

〖思考2〗该培养基对微生物

（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是

。

1．3在统计菌落数目时，常用来统计样品中活菌数目的方法是

。除此之外，

也是测定微生物数量的常用方法。

【补充】显微镜直接计数是测定微生物的方法。

公式：观察到的红细胞平均数∶观察到的细菌平均数＝红细胞含量∶细菌含量

1．4 采用稀释涂布平板法统计菌落数目时，培养基表面生长的一个菌落，来源于

。通过统计

，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在

的平板进行计数。

〖思考3〗从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是

。

〖思考4〗利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是

。

〖思考5〗第

位同学的结果接近真实值。你认为这两位同学的实验需要改进的操作是

。

1．5统计的菌落数比活菌的实际数目

。这是因为当两个或多个细胞在一起时，平板上观察到的只是

菌落。因此，统计结果一般用

来表示。

1．6设置对照的主要目的是

。

1．7对照实验是指除了

的条件外，其他条件都

的实验。满足该条件的称为

组，未满足该条件的称为

组。

〖思考6〗请设计本实验的对照实验组：

方案1：其他同学用A同学的土样进行实验。

方案2：A同学以不接种的培养基作为空白对照。

2．实验设计

2．1 实验设计的内容包括

、

、

和

等。

2．2 根据图示2－7填写以下实验流程：

配制土壤溶液

系列稀释

涂布平板与培养

菌落计数

2．3 土壤微生物主要分布在距地表

cm的近

性土壤中，约

为细菌。

2．4 分离不同的微生物采用不同的稀释度，其原因是

，其目的是保证获得

的平板。细菌稀释度为

，放线菌稀释度为

，真菌稀释度为

。

2．5 培养不同微生物往往需要不同培养温度。细菌一般在

℃培养1～2d，放线菌

一般在

℃培养5～7d，霉菌一般在

℃的温度下培养3～4d。

2．6 在菌落计数时，每隔

h统计一次菌落数目。选取

时的记录作为结果，以防止因

而导致遗漏菌落的数目。

点评：菌种中有些菌体增殖快，有些菌体增值慢，所以培养时间要充足，使得每个菌体都能形成肉眼可观察到的菌落。

2．7菌落的特征包括

等方面。

〖思考8〗土壤微生物种类最多、数量最大的原因是什么？土壤中营养物质含量丰富，环境条件适宜等。

2．9 实验过程

1）取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要

。

2）应在

旁称取土壤

g。将称好的土样倒入盛有

mL无菌水的

中，塞好棉塞。

3）在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在

旁进行。

4）实验时要对

作好标记。注明

等。

5）为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当

。

〖思考9〗在研究未知微生物时务必规范操作，以防被

感染，实验后一定要洗手。

3．结果分析与评价

3．1

对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助

的方法。

3．2

在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的

将尿素分解成了

。氨会使培养基的碱性

，PH

。因此，我们可以通过检测培养基

变化来判断该化学反应是否发生。

3．3

在以

为唯一氮源的培养基中加入

指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变

，说明该细菌能够

。

〖思考10〗测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到

培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现

色，通过记述得出水样中大肠杆菌的数量。你认为在该实验中至少应取

个水样。

（三）课堂总结、点评

土壤

中尿素分

解菌的分

离与计数

人为

条件

分离筛选微生物的原理

有利于目的菌株生长

抑制或阻止其他微生物生长

稀释涂布平板法

显微镜直接计数

微生物计数方法与原理

对照设置与重复设置

实验设计

实验方案

实验操作

结果与分析