课题3　血红蛋白的提取和分离特级教师教学实录

课题3

血红蛋白的提取和分离

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1使用凝胶色谱法分离蛋白质实验中,相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的行进过程,可表示为图中(

)

2为了提取血红蛋白,从学校附近的屠宰场索取新鲜的羊血,对羊血处理的正确操作是(

) A.要在采血容器中预先加入抗凝血剂柠檬酸钠 B.取血回来后,马上进行高速长时间离心

C.将离心后的血细胞加入清水缓慢搅拌 D.重复洗涤直到上清液呈红色为止

3下列有关“血红蛋白提取和分离”的相关叙述,正确的是(

) A.用蒸馏水进行红细胞的洗涤,其目的是去除细胞表面杂蛋白

B.将血红蛋白溶液进行透析,其目的是去除相对分子质量较大的杂质

C.血红蛋白释放时加入有机溶剂,其目的是使血红蛋白溶于有机溶剂

D.整个过程不断用磷酸缓冲液处理,是为了维持血红蛋白的结构

4下列关于血红蛋白提取和分离实验中样品处理和粗分离步骤的描述,正确的是(

) A.红细胞的洗涤:加入蒸馏水,缓慢搅拌,低速短时间离心

B.血红蛋白的释放:加入生理盐水和甲苯,置于磁力搅拌器上充分搅拌

C.分离血红蛋白:将搅拌好的混合液离心、过滤后,用分液漏斗分离

D.透析:将血红蛋白溶液装入透析袋,置于pH为4.0的磷酸缓冲液中透析12 h 5在血红蛋白分离过程中,如果红色带区歪曲、散乱、变宽,其主要原因在于(

) A.样品的处理

B.凝胶色谱柱的装填 C.洗脱过程

D.凝胶色谱柱的制作

6下列各项中,一般不影响凝胶色谱法分离蛋白质的分离度的是(

) A.层析柱的高度

B.层析柱的直径C.缓冲溶液

D.样品的分布

7下列生物大分子的分离方法所对应的原理,不正确的是(

) A.DNA的粗提取——DNA与杂质的溶解性不同

B.凝胶色谱法分离蛋白质——蛋白质分子大小的差异

C.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离蛋白质——蛋白质所带电荷的差异

D.用丙酮提取叶绿体中的色素——色素与其他成分的溶解性差异

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8动物血液常常被选作提取DNA和提取血红蛋白的实验材料,请回答下列有关问题。

(1)提取原DNA和提取血红蛋白,猪血都是适宜材料吗?

因是

。

(2)无论是提取DNA还是提取血红蛋白,都需要先用

对红细胞进行洗涤,其目的是

。

(3)电泳是分离鉴定蛋白质的常规方法。右图为几种蛋白质通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的图谱,据图,你认为相对分子质量最大的蛋白质是

,依此推理该样品在凝胶色谱法中最后流出的蛋白质应该是

。

9．某生物兴趣小组在“蛋白质的提取和分离”实验中,准备从羊的血液中初步提取血红蛋白,设计的血红蛋白提取、分离流程图如下: 实验准备(配制缓冲液、血细胞悬液) →样品处理(洗涤、破碎、离心等) →蛋白质粗分离(透析) →纯化、纯度鉴定(凝胶色谱法、电泳等) 请回答下列有关问题。

(1)样品处理中红细胞的洗涤要用

反复冲洗、离心。向红细胞悬液中加入一定量的低浓度pH=7.0的缓冲液并充分搅拌,可以破碎红细胞,破碎细胞的原理是

。

(2)血红蛋白粗分离阶段,透析的目的是

,若要尽快达到理想的透析效果,可以

(写出一种方法)。

(3)电泳利用了待分离样品中各种分子的

等的差异,使不同带电分子产生不同迁移速度,实现各种分子的分离。

(4)一同学通过血红蛋白醋酸纤维薄膜电泳,观察到正常人和镰刀型细胞贫血症患者的血红蛋白电泳结果如下图所示。由图可知携带者有

种血红蛋白,从分子遗传学的角度做出的解释是

。

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课题3 血红蛋白的提取和分离

1 B 2 A 3 D 4 C 5 B 6 B 7 C 8．(1)猪血是提取血红蛋白的适宜材料,不是提取DNA的适宜材料

猪成熟的红细胞没有细胞核

(2)生理盐水

去除血浆蛋白(杂蛋白) (3)γ球蛋白

清蛋白

9．(1)生理盐水

渗透原理(当外界溶液浓度低于动物细胞内液浓度时,细胞吸水涨破) (2)除去小分子杂质

增加缓冲液的量(或及时更换缓冲液) (3)带电性质以及分子大小、形状

(4)2 携带者具有(控制血红蛋白的)一对不同的等位基因,可以控制合成两种不同的蛋白质

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