课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教学设计(第一课时)

富顺三中三五问题教学模式导学案

专题2 微生物的培养与应用

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

一、学习目标

1 、说明选择培养基的用途和配制要求；2、进行微生物的选择培养和样品中微生物数量的测定；

二、

学习重点、难点 选择性培养基的配制，菌落数目的统计

三、学习过程

【考点1】、选择培养基

1．含义

能让特定的微生物生长，抑制其他微生物生长，从而将 的微生物从混杂的微生物群体中分离出来的培养基。

2．操作原理

配制选择培养基时，可加入某些物质或除去某些营养物质，从而抑制不需要的微生物的生长繁殖。

3.种类

（1）、在培养基全部成分具备的前提下---------加入其他物质

在培养基中加入 可分离酵母菌和霉菌；

（2）、除去某些营养物质

培养基中缺乏氮源可分离 ；

培养基中缺乏有机碳源可分离 ；

（3）、利用培养基中特定化学成分分离特定微生物

培养基中纤维素是唯一碳源可分离 ；

培养基中尿素是唯一氮源可分离 （4）、通过某些特殊环境分离微生物

在缺氧环境中可分离 【考点2】、筛选（分离）菌种

1 、自然界中目的菌的筛选

①、原理：根据目的菌对 的要求，到相应的环境中去找。

②、实例：能产生耐高温的TaqDNA聚合酶的 就是从热泉中筛选出来的

2、实验室中目的菌的筛选

①、原理：人为提供有利于____生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时__ ____或______其他微生物生长。

②、实例：分解尿素的细菌筛选(分离) 【考点3】、土壤中分解尿素细菌的分离与计数

一、分离目的

尿素是一种农业重要的氮肥，但农作物 （能/不能）直接吸收利用，而是首先通过

将尿素在 的催化下分解为氨之后，才能被植物吸收。将尿素分解的反应式是______________________________。

二、分离原理：培养基如何配制：满足水、无机盐、碳源、但只能以 为唯一氮源。

三、实验操作步骤关于如下：

1.分离

土壤取样——→制备培养基——→接种（稀释涂布平板法）——→培养观察——→鉴定

（1）．土壤取样：从肥沃、湿润的土壤中取样。应先 3 cm左右，再取样。

（2）．制备培养基：准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基

Ⅰ、制作培养基

以尿素为唯一氮源的选择培养基

Ⅱ、如何检测断选择培养基是否起到了选择作用（设置对照实验）？

将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显 选择培养基上的数目；

（3）.接种（稀释涂布平板法）

（4）．微生物的培养与观察 （5）.鉴定

1、在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的 将尿素分解成了 。氨会使培养基的碱

性

增强

，PH 升高

。因此，我们可以通过检测培养基 变化来判断该化学反应是否发生。

2、在以尿素为唯一氮源的培养基中加入 指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变 ，说明该细菌能够

分解尿素

。

2、.细菌的计数

（1）、间接计数

稀释涂布平板法

①、原理： 1个菌落→1个活菌

②、操作方法：稀释菌液--﹥涂布平板→统计菌落数

③、统计原则：选 30∼300 个菌落的平板统计；每个稀释度取3个平板取其平均值

计算公式：每克样品中的菌株数=（C/V)* M C:某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；

V:所用稀释液的体积； M:稀释倍数

滤膜计数法：（以大肠杆菌为例）

①、方法：将已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养。

②、结果：在该培养基上计数出现黑色菌落的数目即计算出大肠杆菌的数量

（2）、显微镜直接计数

原理:利用血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量

优点：能准确统计微生物的实际数目。 缺点：不能区分死菌和活菌、不适于对运动细菌的计数、需要相对高的细菌浓度、个体小的细菌不容易在显微镜下观察计数

专题二 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

1、根据生物与环境的相互依存关系判断，下列寻找目标菌株的思路不正确的是(

) A．从热泉中寻找耐热细菌 B．从成熟的葡萄皮上寻找酵母菌

C．从贫瘠的土壤中寻找分解尿素的细菌 D．从树林的腐殖土壤中寻找分解纤维素的细菌

2、制备培养基的步骤是(

) ①溶解

②称量

③计算

④倒平板

⑤灭菌

⑥调pH ⑦分装

A．①②③④⑤⑥⑦ B．③②①⑥⑦④⑤ C．③②①⑥⑦⑤④ D．③②①⑤④⑥⑦

3、用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是( ) A．未接种的选择培养基 B．未接种的牛肉膏蛋白胨培养基

C．接种了的牛肉膏蛋白胨培养基 D．接种了的选择培养基

4、某同学对101、102、103倍稀释液计数的平均菌落数分别是2 760、295和16，则菌落总数为(所用稀释液体积为0.1 mL)(

) A．2.76×104个/mL B．2.95×105个/mL C．4.6×104个/mL D．3.775×104个/mL 5、下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是(

)

A．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、蒸馏水

B．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、琼脂、蒸馏水

C．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、琼脂、蒸馏水

D．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、蒸馏水

6、某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了如下实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此实验相关的问题。

(1)、培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了________和________。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是________和________。

(2)、对培养基进行灭菌，应该采用的方法是____ ____。

(3)、为了使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种________作为对照进行实验。

(4)、培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有________种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越________。

7. 尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类、数量繁多，某生物小组试图探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌(目的菌)。培养基成分如下表所示，实验步骤如下图所示。请分析回答：

KH2PO4

Na2HPO4

1.4 g 2.1 g MgSO4·7H2O 0.2 g 葡萄糖

10 g 尿素

1 g 琼脂

15 g

(1)、培养基中加入尿素的目的是筛选________，这种培养基属于____________培养基。

(2)、“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的________和__________，实验中需要振荡培养，目的是__________________________________。

(3)、转到固体培养基上时，常采用____________法接种，获得单个菌落后继续筛选。

(4)、下列材料或用具中，需要灭菌的是_________；需要消毒的是__________。(填序号) ①、培养细菌用的培养基与培养皿

②玻璃棒、试管、锥形瓶和吸管

③实验操作者的双手

(5)、在做分解尿素的细菌的分离与计数实验时，A同学从对应稀释倍数为10的培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只筛选出大约50个菌落。A同学的实验结果产生的原因可能有__________。

①土样不同

②培养基被污染

③操作失误

④没有设置对照

A．①②③ B．②③④ C．①③④ D．①②④

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