课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课时教学实录

课题2、

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

教学设计

一、教学目标

1．知识与技能

利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数。

2．过程与方法

体验无菌操作的实验过程。

3．情感、态度与价值观

关注我们身边周围都存在细菌，养成讲究卫生的良好习惯。

二、教学重点

对土样的选取和选择培养基的配制。

三、教学难点

对分解尿素的细菌的计数。

四、教学过程

教学内容

教师活动

学生活动

设计意图

导入课题

研究思路

1、筛选菌株

1、让学生阅读课题背景引出课题目的

①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌

②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌

1、教师让学生阅读课本P21，讲解实例：自然界中：DNA多聚酶链式反应是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温（93℃）的DNA聚合酶，因为热泉温度70～80℃，淘汰了绝大多数微生物只有Taq细菌被筛选出来。引导学生得到启示：根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找（即自然界筛选）。 2、实验室中微生物的筛选原理实验室筛选：

（1）原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。 (2)要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等；

方法：

a:抑制大多数微生物不能生长

b:造成有利于该菌生长的环境，

结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过平板稀释等方法对它进行纯化培养分离

学生阅读课题背景

1、学生讨论为什么Taq细菌能从热泉中筛选出来吗？

2、学生讨论培养基如何对微生物进行筛选。

创设情景，引入新课

通过教师讲解知识点，引导学生对知识进行迁移学习，培养学生的逻辑迁移思维。

2、统计菌落数目

1、直接计数法：最常用的显微镜直接计数

血球计数板使用说明

血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的.玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台.中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面,刻有一个方格网.方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用.这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3.

2、间接计数法：最常用方法稀释涂布平板法。

每克样品中的菌株数＝（C÷V）×M C：某一稀释度下平板上生长的平均菌落数

V：涂布平板时所用的稀释液的体积（ml) M：稀释倍数

1、学生举例血球计数板属于直接计数法。

2、学生讨论并区别：稀释涂布平板法是用来计数的，而平板划线法是用来纯化的。

学生设计实验方案：

方案一：由其培养学生的怀疑精神，并根据自身设计实知识的迁移，培养学生的知识整合能力。

3、设置对照

1、对照实验是指除了被测试的条件外，其他条件都相同的实验。满足该条件的称为对照组，未满足该条件的称为实验组。设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。

2、实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时，A同学筛选出约150个菌落，但其他同学只选择出约50个菌落，分析其原因。教师要求学生设计实验方案。

他同学用与A同学相同土样进行实验；

方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。 小结：通过这个事例可以看出，验方案进行验证。培养学生的实验设计能力。

实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。

实验流程

1、教师讲解样品的稀释和稀释液的取样培养流程示意图。

学生讨论思考下列问题：

1、如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？

答：统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平 通过实验设计，培养学生设计实验方案能力，培养学生的学科素养。体验无菌操作的实验过程。

2、土壤取样：

从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。

3、制备培养基和样品的稀释：

制备以尿素为唯一氮源的选择培养基，并按一定倍数稀释。

4、微生物的培养与观察：

每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果。

板，计算出平板菌落数的平均值，然后按课本旁栏的公式进行计算。

2、为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？

答：因为土壤中各类微生物的数量（单位：株/kg）是不同

的，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。

操作提示

1、无菌操作

a、取土用小铁铲、盛土样信封在使用前都需要灭菌。

b、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。

c、在稀释土壤溶液的过程中，每步都要在火焰旁操作。

2、做好标记

注明培养基种类、培养日期、平板培养样品的稀释度等。

3、规划时间

学生讨论实验过程的注意事项。

培养学生的创新思维。

结果分析与评价

学生交流成果，分析自己的成功之处和需要改进的地方。

培养学生学会对别人评价和自我评价的能力

1、培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选菌落

2、样品的稀释操作是否成功

3、重复组的结果是否一致

五、板书设计

课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

一.研究思路

(一）筛选菌株

1、自然界中

2、实验室中：

㈡.统计菌落数目：

1、显微镜直接计数：

2.间接计数法（活菌计数法）

每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数

（三）．设置对照

二.实验设计

(一）、流程

六、课后练习

1.对细菌群体生长规律测定的正确的表述是（

）

A.在液体培养基上进行

B.至少接种一种细菌

C.接种一个细菌

D.及时补充消耗的营养物质

2.使用选择培养基的目的是（

）

A.培养细菌

B.培养真菌

C.使需要的微生物大量繁殖

D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别

3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是(

)

A.CO2和N2

B.葡萄糖和NH3

C.CO2和尿素

D.葡萄糖和尿素

.下列说法不正确的是（

）

A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶

B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值

C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度

D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。

5.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（

）

A.较多的氮源物质

B.较多的碳源物质

C.青霉素类药物

D.高浓度食盐

6、下列有关培养基的叙述正确的是？

A、培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质

B、培养基只有两类：液体培养基和固体培养基

C、固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基

D、微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌

7、不同培养基的具体配方不同，但一般都含有？

A、碳源、磷酸盐和维生素

B、氮

源和维生素

C、水、碳源、氮源和

无机盐

D、碳元素、氧元素、氢元素、氮元素

8、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是?

A、计算、称量、倒平板、溶化、灭菌

B、计算、称量、溶化、倒平板、灭菌

C、计算、称量、溶化、灭菌、倒平板

D、计算、称量、灭菌、溶化、倒平板

9、有关倒平板的操作错误的是?

A、将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上

B、使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰

C、将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌子上

D、等待平板冷却凝固后需要倒过来放置

10、有关平板划线操作正确的是？

A、使用

已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌

B、打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞

C、将沾有菌种的接种环迅速伸人平板内，划三至五条平行线即可

D、最后将平板倒置，放人培养箱中培养

11、关微生物营养物质的叙述中，正确的是？

A、是碳源的物质不可能同时是氮源

B、凡碳源都提供能量

C、除水以外的无机物只提供无机盐

D、无机氮源也能提供能量

答案：ACDBCAACCD