课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教学实录及点评

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数（第1课时）

一、【教学目标】

（一）知识与技能

1、利用选择培养基从土壤中分离出能够分解尿素的分离细菌；

2、运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数。

（二）过程与方法

分析研究思路的形成过程，找出共性和差异性。

（三）情感、态度与价值观

形成无菌不在的概念，养成讲究卫生的习惯。

二、【教学重、难点】

（一）教学重点

1、明确用培养基对微生物进行选择的原理；

2、学会统计微生物数量的方法。

（二）教学难点

1、对分解尿素的细菌的计数。

三、【教学方法】启发式教学

四、【教学工具】多媒体课件

五、【教学过程】

（一）引入新课

展示幻灯片（尿素细胞），情景导入

尿素是一种重要的氮肥，农作物不能直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为

氨和CO2

，这是因为细菌能合成

脲酶。上节课我们学习了培养基的配置以及接种技术。下面我们来学习如何进行细菌的分离，获得所需要的目的微生物。

（二）进行新课

1．筛选菌种

（学生预习2-3min）

（1）自然界中目的菌株筛选的依据是根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。（如：水生耐热细菌Taq的筛选）

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（2）实验室中微生物筛选的原理：

人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、PH等），同时抑制或阻止其他微生物生长

。

点评：生物适应一定环境，环境对生物具有选择作用。所以通过配制选择培养基、控制培养条件等选择目的微生物。

〖互动环节〗

展示本课题使用的培养基配方

〖思考1〗在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是

葡萄糖

，提供氮源的的是

尿素

，琼脂的作用是

凝固剂

。

〖思考2〗该培养基对微生物

具有

（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是

只有能够以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长

。

（3）小结：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制和阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。

2．统计菌落数目

（1）常用方法：

稀释涂布平板法

。除此之外，

显微镜直接计数

也是测定微生物数量的常用方法。

（2）

统计依据：当样品的稀释度足够高时，采用稀释涂布平板法统计菌落数目时，培养基表面生长的一个菌落，来源于

样品稀释液中一个活菌

。通过统计

平板上的菌落数

，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在

30～300 的平板进行计数。

（3）菌落数计算公式：每克样品中的菌落数=（平均菌落数÷涂布的稀释液体积）×稀释倍数

。

〖互动环节〗

展示P22两位同学统计结果的案例

〖思考3〗哪位同学的结果更接近真实值，你认为这两位同学的实验需要改进的操作是：第一位同学需设置重复实验组；第二位同学统计的三个菌落数相差太大，说明操作有误，需重新实验。

（4）小结：统计的菌落数比活菌的实际数目低。这是因为当两个或多个细胞在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。

3．设置对照

（1）设置对照的主要目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。

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（2）对照实验：是指除了

被测试

的条件外，其他条件都

相同

的实验。满足该条件的称为

对照组，未满足该条件的称为

实验

组。

〖互动环节〗

展示P22-23实验结果分析的案例

〖思考4〗请通过设置对照实验，帮助A同学排除上述两个可能影响实验结果的因素。

方案1：其他同学用A同学的土样进行实验。方案2：A同学以不接种的培养基作为空白对照。

六、【课堂小结】

土壤中尿素分解菌的分离与计数

分离筛选微生物的原理

人为

条件

有利于目的菌株生长

抑制或阻止其他微生物生长

微生物计数方法与原理

稀释涂布平板法

显微镜直接计数

对照设置与重复设置

七、【板书设计】

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

1．筛选菌种

2．设置对照

3．统计菌落数目

八、【巩固练习】

1．分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是(

) ①加尿素

②不加尿素

③加琼脂

④不加琼脂

⑤加葡萄糖

⑥不加葡萄糖

⑦加硝酸盐

⑧不加硝酸盐

A．①③⑤⑦

B．②④⑥⑧

C．①③⑤⑧

D．①④⑥⑦

2.使用选择培养基的目的是（

）

A.培养细菌

B.培养真菌

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C.使需要的微生物大量繁殖

D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别

3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是(

)

A.CO2和N2

B.葡萄糖和NH3

C.CO2和尿素

D.葡萄糖和尿素

4．自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题：

实验步骤：

(1)制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液。

(2)选用____________法接种样品。(3)适宜温度下培养。

结果分析：

(1)测定的大肠杆菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确可信的是(

) A．一个平板，统计的菌落数是23 B．两个平板，统计的菌落数分别是22和26，取平均值24 C．三个平板，统计的菌落数分别是21、5和52，取平均值26 D．四个平板，统计的菌落数分别是21、30、24和25，取平均值25 (2)一同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为23.4，那么每毫升样品中的菌株数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.2 mL) ________。

(3)用这种方法测定密度，实际活菌数量要比测得的数量________，因为

_______________________________________________。

(4)某同学在测定大肠杆菌的密度时发现，在培养基上还有其他杂菌的菌落，能否肯定该大肠杆菌的品系被污染了？为什么

___________________________。

九、【教学反思】

本节课的难点在于如何理解什么是选择培养基和微生物的计数问题。针对相关问题，我采取了先知识讲解再带领学生分析案例来让学生理解并学会应用，效果较为不错。

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资料——选择培养基

选择培养基的含义是：在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进需要的微生物的生长。目的是从众多微生物中分离所需要的微生物。

在培养基中加入某种化学物质可以做到这一点，如加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。这里的加入是在培养的培养成分的基础上加入的。

培养基中的营养成分的改变也可达到分离微生物的目的。如培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物，因为非固氮微生物不能在此培养基上生存。当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。如石油是唯一碳源时，可以抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，达到分离能消除石油污染的微生物的目的。改变微生物的培养条件，

也可以达到分离微生物的目的，如将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物。

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