课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数PPT配套优秀教学设计内容

选修1专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教学设计

一、学习目标

1.知识目标：了解有关选择培养基的基础知识。

2.能力目标：a.用涂布平板计数法进行微生物数量测定。b.设计对照实验。

3.情感目标：形成无菌不在的概念，养成讲究卫生的习惯。

二、学习重点：对土样的选取和选择培养基的配制。

三、学习难点：对分解尿素的细菌的计数。

四

、教学流程

环节一 课前导入：情境导入本节目标

师：从教材课题背景导入，展示课题目标。

背景材料：尿素的利用:尿素[CO(NH2)2]——重要的农业氮肥。只能被土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸收利用。

细菌利用尿素的原因：土壤中的含脲酶的细菌能够分解尿素。

展示课题目标：1.从土壤中分离出能够分解尿素的细菌

2.

生：阅读倾听。

环节二 讲授新课

1.知识目标

（一）筛选菌株

1.实例

以PCR技术为例，引导学生探究问题的解决方法。

PCR技术：一种在体外将少量DNA大量复制的技术。此项技术要求使用耐高温的DNA聚合酶。

提出的问题—如何寻找耐高温的DNA聚合酶？ 解决问题的思路—寻找耐高温环境。

原因：高温条件淘汰了绝大多数微生物。

获得启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。

2.实验室微生物的筛选原理

引导学生根据上面实例归纳实验室微生物的筛选原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。 统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌

3.选择培养基 （1）让学生分析本课题使用的培养基成分，回答问题。

KH2PO4 1.4g NaHPO4 2.1g MgSO4 .7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。

问题1：该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？

碳源：葡萄糖、尿素；氮源：尿素。

问题2：此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？

能。只有产生脲酶的细菌才能利用尿素作为氮源而生存。

（2）共同归纳选择培养基概念

允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。

（3）举例说明选择培养基作用

加入青霉素的培养基：细菌不生长，酵母菌、霉菌等真菌能生长。

不加含碳有机物的无碳培养基：分离自养型微生物。

（二）统计菌落数目

1.显微镜直接计数

引导学生回忆血细胞计数板计数相关知识，讲解显微镜直接计数的原理、做法、优缺点。

（1）原理：利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定

容积的样品中微生物的数量。

（2）做法：每一个大方格边长为 1mm ，则每一大方格的面积为1mm，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm。

（3）优缺点：

优点：能准确统计微生物的实际数目。

缺点：不能区分死菌和活菌。

2.间接计数（活菌计数法）

引导学生回忆稀释涂布平板法相关知识，讲解稀释涂布平板法计数的原理，以例题讲解计数方法和设置重复组的重要性。

（1）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

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（2）计数：

【例1】某同学在稀释倍数为10的培养基上测得平板上的菌落数的平均值为234，那么每毫升样品中菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL）（ ）

A.2.34×10

B.2.34×10【答案】B 【解析】稀释倍数为10，0.1 mL稀释液的菌落数的平均值为234，则每毫升样品中菌落数就为234/0.1×10=2.34×10。

计算公式：每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mＬ)，M代表稀释倍数。

【例2】两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为10的培养基中，得到以下两种统计结果。

1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。

2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。

你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？ 甲：没有重复实验（至少涂布3个平板）。 乙：A组结果误差过大，不应用于计算平均值。 【方法点拨】

稀释涂布平板法计算注意事项

①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。

②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。

③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。

④涂布平板法所选择的稀释度很重要，一般以三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌落数在50个左右为最好。

环节三 课堂总结

一、选择培养基的成分：尿素作为唯一的氮源。

二、鉴定方法：在培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变红，pH升高，说明细菌能分解尿素。

三、统计菌落数目的方法

（1）显微镜直接计数法

（2）间接计数法（稀释涂布平板计数法）

①计算公式：每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M ②操作：设置重复组，选择菌落数30～300的平板进行计数。

（3）设置对照

①证明培养基未被污染，用空白培养基作对照。

669689 6C.234

D.23.4

②证明选择培养基的选择作用：用牛肉膏蛋白胨培养基接种等量同种菌液作对照。

三、统计菌落数目的方法

（1）显微镜直接计数法

（2）间接计数法（稀释涂布平板计数法）

①计算公式

（3）设置对照

每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M

②操作：设置重复组，选择菌落数30～300的平板①证明培养基未被污染，用空白培养基作对照。

②证明选择培养基的选择作用：用牛肉膏蛋白胨培同种菌液作对照。