课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优质公开课教案

“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”教学设计

广州市第六十五中学 李黎明 一、学习内容：“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”新课第一课时

二、学习目标：

1.

理解分离微生物的原理。

2.

利用选择培养基分离细菌。

3.

对微生物进行计数。

三、教学重难点

教学重点：对土样的选取和选择培养基的配置。

教学难点：对分解尿素的细菌的计数。

四、教学过程

导入新课。

播放环保影片，激发学生的兴趣活跃课堂气氛，又引出对土壤的保护，加大学生对土壤进行研究的兴趣。

通过问题串的方式，层层推进，引导学生理解分离微生物的原理。

问题一：尿素是一种重要的农业氮肥。但是尿素不能直接被农作物吸收，那氮肥中的氮是如何供植物利用的呢？（土壤中存在分解尿素的细菌。）

问题二：这些细菌为什么能否分解尿素呢？（因为它们能合成脲酶，反应式）

问题三：

选择怎样的土壤进行取样？

（选择厕所附近的土壤或者经常施用尿素的农田，老师简要介绍尿素的发现过程以及尿素合成的历史，。情感教育） 问题四：土壤中的微生物很多，如何将能分解尿素的细菌分离出来呢？

通过列举耐热细菌筛选的实例，启发学生寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。而实验室里，人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。从而提出选择培养基的概念---允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。

问题五：如何配置分解尿素细菌的培养基呢？

学生活动探究一：

老师指导学生完成学案上的培养基的配置和分析，通过对比两种培养基的碳源和碳源，分析选择培养基是如何进行选择的。我们了解了选择培养基的配方后，就可以制备培养基了。

思考：本实验应制备几种培养基？（让学生讨论分析，明白利用牛肉膏蛋白胨培养基做对照，才能证明培养基是否具有选择作用，明白设置对照的重要性）

配置好培养基后，接下来就要对土壤样品中细菌进行接种、纯化，对比上节所学稀释涂布平板法和平板划线法，接下来我们需要采用稀释涂布平板法，进行培养和计数。

稀释涂布平板法计数原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。

稀释涂布平板法计数过程：1.做样品系列稀释液；2.用适当的稀释液涂布平板；3.放到合适的条件下培养

思考：

1.对土壤样品进行稀释的目的是什么呢？（获得在平板上的菌落数在30~300之间，便

于统计。）

2．如何稀释土壤样品呢？（请同学对着图来说一说）

3.经过稀释，我们得到了不同浓度的土壤稀释溶液，就可涂布接种了。是不是某一浓度的土壤稀释液只要涂布一个平板，培养后统计的菌落数就可作为计算1g土壤样品中尿素细菌的依据呢？为什么？

4.如何统计平板上的菌落数呢？

学生活动探究二(见学案) 说明设置重复组的重要性。在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。

计算公式: 每克样品中含菌数＝(C÷V)×M。

缺点：统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，为什么？（原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落）

补充显微镜计数法的相关知识，其缺点是不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察；

小组讨论：阅读P22～23页“（三）设置对照”一段讨论教材中提出的问题

(1)A同学出现此结果的可能原因？

土样不同

培养基污染

(或混入了其他的含氮物质) (2)你能通过设置对照实验，帮助A同学排除上述两个可能影响实验结果的因素？

假设一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验

结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。

假设二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。

小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。

判断培养基中是否有杂菌污染：将未接种的培养基同时进行培养。

判断选择培养基是否具有筛选作用：完全培养基（营养成分齐全）接种后培养观察菌落数目。

思考：如果有同学实验发现：普通培养基上菌落几乎长满了；选择培养基上菌落较少；空白对照培养基未出现菌落，这一结果说明了什么？

我们现在一定确定这个平板上长出的细菌就是分解尿素的细菌吗？

不能，需要进行进一步的鉴定，鉴定方法如下：

观察菌落的形状、大小、隆起程度和颜色是否与分解尿素细菌是一样的

通过化学的方法来鉴定：尿素细菌的代谢产物是氨。而氨溶解在水中呈碱性。酚红在碱性条件下变红色。如果培养基出现颜色是红色的，我们可以氨的产生确认细菌是尿素细菌。如果没有红色，说明不是尿素细菌。

提升：我们为什么要进行土壤尿素菌的分离和计数呢？对我们的生活和环境有什么意义？除了尿素细菌，我们是否还可以分离和计数其他的菌类呢？

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五．构建知识网络，巩固落实提高

六．板书设计（略）

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