课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教案3

微生物数量测定微专题：

2018年生物学科（选修）考试说明考点等级要求有五处变化，四升一降，“某种微生物数量的测定”就是由B升为C级要求，本考点内容等级提升，本考点的复习难度有必要提高，以应对其在非选题中出现的可能，特编制一下典型题例。

典型题例：某研究小组欲进行“土壤中某样品细菌的分离与计数”的实验，具体操作步骤如下。

1．土壤取样：从肥沃、湿润的同一块土壤中取样，装入准备好的信封中。

32．制备培养基：准备牛肉膏蛋白胨培养基和培养基A（具体配方见表1），将菌液稀释相同的倍数（10～710）。

表1：培养基A配方

KH2PO4 1.4g Na2HPO4 2.1g

MgSO4·7H2O 0.2g

葡萄糖

10.0g

尿素

1.0 g

琼脂

15.0 g

将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL。

733．微生物的培养与观察：按照由10～10稀释度的顺序分别吸取0.1 mL进行平板涂布操作。将涂布好的培养皿放在30 ℃温度下培养。比较牛肉膏培养基和培养基A中菌落的形态、数量等，并做好记录。

4．细菌的计数：当菌落数目稳定时，选取合适的平板进行计数并计算出样品中细菌的数目。

请回答下列问题：

（1）根据培养基A的配方，可确定其在常温下属于固体培养基还是液体培养基？属于选择培养基还是鉴别培养基？

（2）实验中牛肉膏蛋白胨培养基所起的作用是什么？这种作用是如何体现出来的？

（3）本实验至少需要准备多少个牛肉膏蛋白胨培养基和培养基A？

（4）进行涂布平板操作时，是否需要更换移液管？为什么？

（5）稀释涂布平板法常用来统计样品中活菌数还是总菌数？其理论依据是什么？计数成功的关键是什么？用此种方法统计的数目往往比实际数目偏低的原因是什么？

（6）为什么要当菌落数目稳定时才进行计数?计数时有哪些注意事项？（至少说出2个）

6（7）以下是该研究小组中的两位同学在对应稀释倍数为10的培养基中，得到以下两种统计结果。

同学甲:在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。

同学乙:在该浓度下涂布了三个平板，统计的菌落数分别为21、 212和256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。

你认为哪位同学的结果更接近真实值？你认为这两位同学的实验需要改进吗？如果需要，如何改进？

1

5(8)以下是该研究小组中的另一位同学在对应稀释倍数为10的培养基中得到的统计结果。

平板编号

菌落数

1 2 3 4 5 6(空白平板) 13 156 462 178 191 0 土壤样品溶液接种量均为0.1mL。

每克土壤样品中的细菌数量为多少？与血细胞计数板相比，此计数方法测得的细菌数目偏多还是偏少？为什么？若空白平板上出现3个菌落，则应该如何处理该实验数据？

6（9）以下为该研究小组某同学的一个平板（稀释倍数为10）经培养后的菌

落分布图。推测该同学接种时可能的操作失误是？

（10）实验时，该研究小组中的A同学从培养基上筛选出大约320个菌落，

而其他同学只选择出大约180个菌落（稀释度相同）。A同学的实验结果产生的原因可能有？

（11）随着培养时间的延长，平板上会产生菌落。平板上生长的菌落一定是所需要的微生物吗?为什么？如何进一步的鉴定？

巩固训练：毒死蜱是一种有机磷杀虫剂,长期使用将导致土壤中农药残留严重。某研究小组从长期施药的韭菜温室土壤(偏酸性)里分离出能降解毒死蜱的木霉,并对其降解特性进行初步研究。分析回答:

(1)用于分离木霉菌种的培养基属于_________培养基。配制此培养基时,应加入___________作为唯一碳源。接种前,将培养基在适宜温度下放置适当的时间,观察培养基_________,以确定培养基是否被污染。

(2)纯化木霉时,统计出0.2 mL的稀释液在稀释倍数为10的平板上的平均菌落数为40个,则每毫升样液中的菌落数为____个。用此法测定木霉数量,实际活菌数量要比统计的菌落数量_____,原因是______。

(3)探究pH对木霉降解毒死蜱活性的影响。

①研究小组向不同pH的培养基中分别加入100 mg/L毒死蜱,5天后检测毒死蜱的残留量(图1)。由图可推知:在偏酸性的土壤中,________________________。

②研究小组向不同pH的培养基中分别加入100 mg/L毒死蜱,再分别接种1 mL木霉悬液,混合均匀,5天后检测毒死蜱的残留量(图2)。在此韭菜温室土壤中,若要提高木霉对毒死蜱的降解活性,可对土壤作何处理?__________________________ ____________________。

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