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专题2《微生物的培养与应用》单元练习

一、选择题

1．在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落．产生A同学结果的原因可能有（ ）

①土样不同 ②培养基污染 ③操作失误 ④没有设置对照．

A．①②③ B．②③④ C．①③④ D．①②③④

2．在农田土壤的表层自生固氮菌较多．用表层土制成的稀泥浆接种到特制的培养基上培养，可将自生固氮菌与其他细菌分开，对培养基的要求是（ ）

①加抗生素

②不加抗生素

③加氮素

④不加氮素

⑤加葡萄糖

⑥不加葡萄糖

⑦37℃恒温箱中培养

⑧28～30℃恒温箱中培养．

A．①③⑤⑦ B．②④⑥⑧ C．②④⑤⑧ D．②④⑥⑦

3．稀释涂布平板法是微生物培养中的一种常用的接种方法．下列相关叙述错误的是（ ）

A．操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释

B．需将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面

C．不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单个的菌落

D．操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理

4．有关倒平板的操作错误的是（ ）

A．将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上

B．使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰

C．将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌子上

D．等待平板冷却凝固后需要倒过来放置

5．在纤维素分解菌的鉴定实验中，纤维素酶的测定方法一般是

A．对纤维素进行定量测定

B．对纤维素酶分解纤维素后所产生的葡萄糖进行定量测定

C．对纤维素酶分解纤维素后所产生的纤维二糖进行定量测定

D．对纤维素分解菌进行定量测定

6．刚果红染色时，加入刚果红应在

①制备培养基时 ②梯度稀释时 ③倒平板时 ④涂布时 ⑤长出菌落时

A．①③ B．②⑤ C．③⑤ D．④⑤

7．通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基中加入10%的酚可以抑制细菌和霉菌。利用上述方法能从混杂的微生物群体中分别分离出

①大肠杆菌

②霉菌

③放线菌

④固氮细菌

A．④②③ B．①②③ C．①③④ D．③④①

8．从混杂的微生物群体中选择优良的单一纯种的方法不包括

A．根据微生物对碳源需要的差别，使用含不同碳源的培养基

B．根据微生物对特殊营养物的需求，在培养基中增减不同的特殊营养物

C．根据微生物对抗生素敏感性的差异，在培养基中加入不同的抗生素

D．根据微生物耐热性的不同，利用高温、高压消灭不需要的杂菌

9．用稀释涂布平板法来统计样品中尿素分解菌的数目，为了提高实验结果的可信度，往往要设置对照，对于对照组的要求不包括哪项

A．对照组培养基也严格灭菌，且不接触任何生物

B．对照组和实验组培养基放在相同的条件下培养

C．所用培养基成分及PH大小完全与实验组一致

D．培养基的量的大小与实验组必须绝对相同

10．稀释涂布平板法是微生物培养中的一种常用的接种方法，下列相关叙述中错误的是

A．操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释

B．需将不同稀释浓度的菌液分别涂布到固体培养基表面

C．不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单个的菌落

D．操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理

11．下列有关微生物培养与应用的说法正确的是（ ）。

A．天然培养基是指直接取自自然界不需加工的培养基

B．接种前需对培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手等进行严格的灭菌处理

C．大肠杆菌的纯化培养过程包括培养基的配制和纯化大肠杆菌两个阶段

D．分离分解尿素的细菌时，尿素是培养基中唯一的氮源和碳源

12．牛肉膏可以为微生物提供

（ ）

A．碳源、氮源和维生素 B．氢元素和氧元素

C．碳源、氮源、磷酸盐和维生素 D．碳源、氮源和无机盐

13．选择培养时应将锥形瓶固定在（ ）

A．桌子上 B．温箱里 C．窗台上 D．摇床

14．下列材料中纤维素含量最高的是（ ）

A．杨树 B．小麦 C．玉米D．棉花

15．实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效应，用3种细菌在事先准备好的琼脂块平板上画3条等长的平行线（3条线均与下图中的链霉素带接触），将平板置于37℃条件下恒温培养3天，结果如图所示。从实验结果分析以下叙述，不正确的是（ ）

A．链霉素能阻止结核菌的生长

B．链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效

C．链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效

D．链霉素可以用于治疗伤寒病人

16．稀释涂布平板法分离分解尿素的细菌时使用的涂布器应保存在体积分数为70%的酒精中,取出后又要放在酒精灯火焰上引燃,这两步分别属于什么技术?（ ）

A．灭菌、灭菌 B．消毒、消毒

C．灭菌、消毒 D．消毒、灭菌

17．下列有关平板划线法的操作错误的是（ ）。

A．将接种环放在火焰上灼烧

B．将已冷却的接种环伸入菌液中沾取一环菌液

C．沾取菌液和划线要在火焰旁进行

D．接种环划线要将最后一区的划线与第一区的划线相连

18．分离土壤中分解尿素的细菌,对培养基的要求是（ ）。

①加尿素

②不加尿素

③加琼脂

④不加琼脂

⑤加葡萄糖

⑥不加葡萄糖

⑦加硝酸盐

⑧不加硝酸盐

A．①③⑤⑦ B．②④⑥⑧

C．①③⑤⑧ D．①④⑥⑦

19．将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37℃恒温箱的目的是

A．对比观察培养基有没有被微生物利用

B．对比分析培养基是否被杂菌污染

C．没必要放人未接种的培养基

D．为了下次接种时再使用

20．在光亮处用同一种培养液分别培养单细胞绿藻和单细胞的酵母菌，其结果如下图所示（甲为绿藻，乙为酵母菌），造成这种结果的原因是培养液中

A．缺少无机盐 B．氧气含量太高

C．缺少有机养分 D．不含二氧化碳

二、综合题

21．为了调查赣江的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌的分离等工作。回答下列问题：

（1）制备实验所需的培养基时，在各成分都溶化后和分装前，要进行的是 和灭菌，对培养基进行灭菌的常用方法是 。倒平板时要待平板冷凝后，将平板倒置，其主要原因是

（2）该小组可采用上图②所示的 （方法）检测水样中的细菌含量。在接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是________________；然后，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0．1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为________________。

（3）该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过灼烧灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线。这样做的目的是________________。

（4）在纯化过程中，在固体培养基上划线分离过程中，正确的操作是____________

A．每次划线时，接种环都需要蘸菌液一次

B．划线分离时，需要把接种环深入到培养基中进行接种

C．划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连

D．在超净平台中进行接种时，不能关闭过滤风

22．2015年与我国女科学家屠呦呦平分诺贝尔生理学或医学奖的是爱尔兰科学家威廉一坎贝尔和日本药物科学博士聪大村，他们二人的贡献是发现了一种新的药物，名为阿维菌素，其衍生产品降低了河盲症和淋巴丝虫病的发病率，同时还能有效对抗其他寄生虫病，治疗效果显著．聪大村从土壤样品中分离链霉菌的新菌株，在实验室内通过成千上万链霉菌培养物筛选出一些较有发展前途的菌株，这就是阿维菌素的来源．

（1）制备链霉菌培养基时，在各成分都溶化后和分装前，要进行的是 和灭菌，对培养基

进行灭菌的常用方法是 ．倒平板时要待平板冷凝后，将平板倒置，其主要原因是

（2）图①是在纯化过程中通过 法分离培养的结果，在培养基上接种时接种环需通过灼烧灭菌，完成图中划线操作，共需要灼烧接种环 次．图②表示的是用 法接种培养后得到的结果．

（3）在纯化过程中，在固体培养基上划线分离时，经培养，在划线的末端出现 ，表明菌已分离．在此过程中，正确的操作是

A．每次划线时，接种环都需要蘸菌液一次

B．划线分离时，需要把接种环深入到培养基中进行接种

C．在超净平台中进行接种时，不能关闭过滤风

D．划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连

（4）该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养．结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快．分析其原因是：振荡培养能提高培养液的 的含量，同时可以使菌体与培养液充分接触，提高 的利用率．

23.临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题：

(1)为了从样本中获取致病菌单菌落，可用 法或 法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。

（2）取该单菌落适当稀释，用 法接种于固体培养基表面，在37培养箱中培养24h，使其均匀生长，布满平板。

（3）为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A ；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B ；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明 ；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A 的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的 ；

（4）根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用抗生素 。

参考答案

1．A

【解析】

试题分析：①土样不同可能导致计数偏差，①正确；

②培养基污染，②正确；

③操作失误可能增加微生物的数量和种类，菌落会增多，③正确；

④没有设置对照不会增加菌落数目，④错误．

A、①②③正确．

故选：A．

2．C

【解析】

试题分析：自生固氮菌是异养菌，生长繁殖需要有机碳源；自生固氮菌能利用空气中的氮气，培养基中不加氮源，固氮菌能生长繁殖，不能固氮的菌不能生长繁殖，；自生固氮菌的生长繁殖的最适宜温度是28～30℃；自生固氮菌对青霉素敏感，培养基中不能加青霉素．所以如果从土壤浸出液中分离出自生固氮菌对培养基的要求是②不加抗生素、④不加氮素、⑤加葡萄糖、⑧28～30℃恒温箱中培养．

故选：C．

3．C

【解析】

试题分析：A、稀释涂布平板法，包括系列稀释和涂布平板两个过程，涂布平板之前需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释．A正确．

B、涂布平板时，需要将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面．B正确．

C、只有稀释度足够大的菌液才能在培养基表面形成单个的菌落．C错误．

D、操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理，以防止杂菌污染．D正确．

故应选C．

4．C

【解析】

试题分析：A、将过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，防止培养皿被污染，A正确；

B、使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰，对锥形瓶的口径处进行灼烧灭菌，防止空气中的杂菌污染，B正确；

C、倒平板时不能把培养皿盖完全打开并放到桌面上，这样会污染培养皿中的培养基，C错误；

D、倒平板后冷却需要倒过来放置，防止皿盖上的水珠滴落到培养基上，D正确．

故选：C．

5．B

【解析】在纤维素分解菌的鉴定实验中，纤维素酶的测定方法一般是对纤维素酶分解纤维素后所产生的葡萄糖进行定量测定，故选B。

【考点定位】纤维素分解菌的鉴定实验

【名师点睛】通过鉴别培养基上是否形成透明圈来对分解纤维素的微生物进行初步筛选，为确定得到的是纤维素分解菌，需要进行发酵产生纤维素酶的实验，并且进行纤维素酶的测定，测定方法一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量测定。

6．C

【解析】常用的刚果红染色法有两种，一种先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，另一种是在倒平板时就加入刚果红，故选C。

【考点定位】微生物的分离和培养

【名师点睛】刚果红染色法有两种：

（1）先培养微生物再加入刚果红进行颜色反应

优点：显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用

缺点：操作繁琐,加入的刚果红会使菌落之间发生混杂

（2）在倒平板时就加入刚果红

优点：不存在菌落的混杂问题

缺点：1）在纤维素粉和琼脂、土豆汁中都含有淀粉类物质,可以使能够产生淀粉酶的微生物产生假阳性反应 2）有些微生物有降解色素的功能

7．A

【解析】固氮细菌不需要专门添加氮源，在缺乏氮源的培养基上可从多种细菌中分离得到自生固氮细菌④；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌的生长，从而可以分离出霉菌②；10%酚可以抑制细菌和霉菌，但放线菌③可生存，故选A。

【考点定位】培养基对微生物的选择作用

【名师点睛】选择性分离培养基，支持特定微生物的生长而抑制其他微生物生长的分离培养基，利用这个原理可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。

8．D

【解析】根据微生物对碳源需要的差别，使用含不同碳源的培养基，例如培养自养型的菌，在培养基中不需加入碳源，A正确；不同的微生物需要不同的生长因子，根据需要的菌可以在培养基中加入相应的生长因子进行分离，B正确；根据微生物对抗生素敏感性的差异，在培养基中加入不同的抗生素，C正确；高温高压会将所有细菌（包括需要的菌类）一起杀死，D错误。

【考点定位】微生物选择培养

【名师点睛】根据微生物生长所必需的营养：碳源、氮源、无机盐、水和生长因子．因微生物不同，对碳源、氮源、无机盐、生长因子的需求也不相同，可以根据微生物的生长需求制备特殊的选择培养基，来获得单一纯种；也可以根据微生物对不同抗菌素的敏感性不同，加入不同

的抗菌素来获得目的菌种。

9．D

【解析】对照组培养基也要严格灭菌，且不接种任何微生物，为空白对照，A正确；对照组和实验组的培养基都要置于相同条件下培养，以保证单一变量，B正确；根据实验设计的单一变量原则，对照组所用培养基的成分及pH应与实验组完全一致，C正确；进行倒平板时对照组培养基用量的大小与实验组不一定绝对相同，且对实验结果无影响，D错误。

【考点定位】稀释涂布平板法

【名师点睛】用稀释涂布平板法来统计样品中尿素分解菌的数目，为了提高实验结果的可信度，往往要设置对照

，对于对照组的要求包括：对照组培养基也严格灭菌，且不接触任何生物；对照组和实验组培养基放在相同的条件下培养；所用培养基成分及PH大小完全与实验组一致。

10．C

【解析】稀释涂布平板法包括系列稀释和涂布平板两个过程，涂布平板之前需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释，A正确；涂布平板时，需要将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面，B正确；只有稀释度足够大的菌液才可在培养基表面形成单个的菌落，C错误；操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理，D正确。

【考点定位】微生物的分离和培养

【名师点睛】稀释涂布平板法需多次稀释，稀释到一定程度才能在培养上形成单个菌落。该方法可用于菌种的分离和计数。

11．C

【解析】天然培养基也称复合培养基，是含有化学成分还不清楚或化学成分不恒定的天然有机物，A错误；对于培养基、培养皿、接种环来说,必须要进行严格的灭菌处理，因为它们是直接接触菌种，直接参与培养微生物的。而实验操作者双手不是直接参与，只需要消毒处理即可，B错误；大肠杆菌的纯化培养过程包括培养基的配制和纯化大肠杆菌两个阶段，C正确；分离分解尿素的细菌时，尿素是培养基中唯一的氮源，尿素和葡萄糖是碳源，D错误。

【考点定位】微生物培养与应用

12．C

【解析】牛肉膏富含碳源、氮源、无机盐（磷酸盐）等各种微生物成长必须的营养物质，还含有维生素，故选C。

【考点定位】微生物的营养物质

【名师点睛】微生物生长繁殖所需的营养物质主要有水、碳源、氮源、无机盐和生长因子等。

13．D

【解析】纤维素分解菌选择培养时要将锥形瓶固定在摇床上，使培养液变浑浊，若变浑浊了，说明菌体生长了，故选D。

【考点定位】微生物的生长

14．D

【解析】纤维素是自然界中分布最广、含量最多的一种多糖，占植物界碳含量的50%以上，棉花的纤维素含量接近100%，为天然的最纯纤维素来源，故选D。

【考点定位】组成细胞的化合物

【名师点睛】纤维素是由葡萄糖组成的大分子多糖，不溶于水及一般有机溶剂，是植物细胞壁的主要成分。

15．D

【解析】图中结核菌最短，说明链霉素能够阻止结核菌的生长，且比对伤寒菌、霍乱菌更有效，ABC正确；图中接种伤寒菌的琼脂块没有变短，说明链霉素对伤寒菌没有作用，所以链霉素不能用于治疗伤寒病人，D错误。

【考点定位】实验探究抗生素对不同细菌的作用

【名师点睛】据图分析，已知3条平行菌线均与链霉素菌带接触，链霉素对细菌抗生效应大小，可从图中横向的三条菌带长度加以判别，菌带越长，说明此菌生长良好，链霉素对该菌的杀灭作用越弱；菌带越短，说明此菌生长不好，链霉素对该细菌杀灭作用越强。

16．D

【解析】在稀释涂布平板法中，将涂布器保存在体积分数为70%的酒精中的目的是为了消毒；涂布器灭菌时，将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃待酒精燃尽后，冷却8～10s再用，目的是为了灭菌，故选D。

【考点定位】消毒与灭菌

【名师点睛】常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，目的是让聚集在一起的微生物分散成单个细胞，然后得到由这个细胞繁殖而来的肉眼可见的单个群落。稀释涂布法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，在适宜条件下培养．在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。

17．D

【解析】每次接种的前后，将微生物的接种环直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌， A正确；高温会将菌体杀死，所以灼烧后的接种环必须冷却后，才可以伸入菌液中蘸取一环液，否则会烧伤或烧死微生物，B正确；酒精灯火焰旁的杂菌比较少，所以沾取菌液和划线都要在火焰旁进行，以防止空气中的杂菌，C正确；划线时要避免最后一区的划线与第一区线连．

因为最后一区是细菌最稀少的，而第一区是细菌最致密的，如果连在一起会影响单个菌落的分离效果，D错误。

【考点定位】平板划线法

【名师点睛】平板划线法通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面；在数次划线后培养，可以分离由一个细菌繁殖而来的肉眼可见的子细胞群为菌落。转换划线角度后要对接种环进行灼烧灭菌再进行划线；等待平板冷却凝固后需要倒过来放置，目的是防止培养皿内壁上出现的冷凝水污染培养基。

18．C

【解析】分解尿素的细菌是异养微生物，因此培养基中应该加入有机碳源，如葡萄糖；分离分解尿素的菌的培养基从功能上分属于选择培养基，应该以尿素为唯一氮源；从物理性质上分属于固体培养基，因此应加入凝固剂琼脂糖，故选C。

【考点定位】微生物的培养基成分

【名师点睛】分离土壤中分解尿素的细菌的原理是在以尿素为唯一氮源的培养基上，只有能分解尿素的细菌才能以尿素为氮源生长繁殖，不能分解尿素的细菌因缺乏氮源而无法生长繁殖。

19．B

【解析】将接种后的培养基和未接种的培养基同时放入37℃恒温箱，目的是作为空白对照，判断培养基是否被污染。一段时间后若未接种的培养基有菌落说明培养基被污染，则培养基不能使用，若无菌落说明培养基没有被污染，可以使用，故选B。

【考点定位】微生物的分离和培养

【名师点睛】本题是通过实验验证培养基是否被污染，分析实验设计的思路应是把不接着任何菌种的培养基放在恒温箱中培养，一段时间后若有菌落说明培养基被污染，若无菌落说明培养基没有被污染，然后根据选项分析判断。

20．C

【解析】微生物的生活需要营养物质，酵母菌的细胞结构没有叶绿体，不能自己利用无机物合成有机物，所以造成酵母菌数量下降的原因是培养液中缺少有机养分（或营养物质、有机物等），而绿藻的数量上升的原因是单细胞绿藻在光下能进行光合作用制造有机物，故选C。

【考点定位】酵母菌的营养方式、植物的光合作用

21．（1）调整pH 高压蒸汽灭菌 防止培养皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染

（2）稀释涂布平板法 检测培养基平板灭菌是否合格 3．8×107

（3）将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落不连续单个菌落 D

【解析】

试题分析：（1）配置培养基在溶化后和分装前需要先进行调pH和灭菌，故是调整pH。常用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。倒平板后要倒置的主要原因是防止培养皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染。

（2）图中菌落分布均匀应是采用了稀释涂布平板法。接种前对空平板进行培养是为了检测培养基平板灭菌是否合格。计数应取其平均值即38*10*100*103= 3．8×107个/L。

（3）平板划线法总是从上一区域的末端划线是为了将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落不连续单个菌落。

（4）平板划线法中只需要第一次蘸取菌液，故A错误。划线分离时要轻轻划线不能把接种环深入到培养基中，故B错误。划线时首尾不能相连，故C错误。在超净台中接种接种时，为了防止其它杂菌的污染不能关闭过滤风，故D正确。

考点：本题考查微生物的培养和分离相关知识，意在考察考生对知识点的识记理解掌握程度。

22．（1）小于 用滤膜过滤除菌

（2）氮源 琼脂 鉴别

（3）黑色菌落 偏低 两个或多个大肠杆菌连在一起时，平板上只能观察到1个菌落

【解析】

试题分析：（1）图甲中滤膜的孔径应小于大肠杆菌，滤膜过滤才能获得大肠杆菌，对不耐高温的试剂，可以用滤膜过滤除菌。

（2）培养基应该满足微生物生长需要，因此配制图乙中的基础培养基时除了水分、无机盐以外，还应加入氮源，该培养基属于固体培养基，因此还需要加入凝固剂琼脂。该培养基能鉴定大肠杆菌，因此属于鉴别培养基。

（3）大肠杆菌的代谢产物与伊红-美蓝结合，使菌落呈黑色，并有金属光泽。计算出单位体积样品中大肠杆菌数目。理论上他们的统计值要比实际偏低，原因是两个或多个大肠杆菌连在一起时，平板上只能观察到1个菌落。

考点：本题主要考查微生物的培养和分离相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。

23．

（1）废弃油脂（2分） 固体（2分） 紫外线（2分）

（2）苏丹Ⅲ（或苏丹Ⅳ）（2分） 橘黄色（红色）（2分）

（3）①25~35℃（3分）

②酶降低活化能的作用比无机催化剂更显著（2分）

【解析】

（1）实验室用于筛选废弃油脂分解菌的培养基应当以废弃油脂作为唯一碳源；培养基中除添加必需的营养物质外，还需要加入琼脂，因此该培养基从物理性质上划分属于固体培养基。在微生物的培养过程中常常要采取无菌技术，其中接种室、接种箱和超净工作台在使用前应当用紫外线进行消毒。

（2）脂肪的鉴定一般选用苏丹Ⅲ（或苏丹Ⅳ）试剂，其原理是该试剂能够使脂肪显橘黄色（红色）。

（3）据图可知，酶的活性受温度的影响，若要进一步探究油脂分解酶的最适温度，需要在25~35℃的温度范围内，设置一系列等温度梯度的实验组继续进行实验。

（4）与无机催化剂相比，酶具有高效性的原因是酶降低活化能的作用比无机催化剂更显著。

【考点定位】

微生物的培养

【名师点睛】配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的注意事项

（1）倒平板的适宜温度是50 ℃左右，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。

（2）平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。

24．

（1）植物体细胞杂交 生物膜的流动性和植物细胞的全能性（2分）

（2）纤维素酶和果胶酶（2分）

（3）植物激素 无菌

（4）9（2分） 2（2分）

（5）①大肠杆菌无内质网、高尔基体，不能对分泌蛋白进行加工（2分） ②该基因结构中有内含子，不应该直接导入原核细胞（2分）（或其他合理答案）

【解析】

（1）由题意“科学家将他们的花粉除去细胞膜后进行原生质体融合，再把这些融合细胞进行组织培养”可知：上述育种方法采用了植物体细胞杂交技术，其生物学原理是生物膜的流动性和植物细胞的全能性。

（2）花粉细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，因此采用酶解法，可用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁。

（3）在组织培养的培养基中除了必要的营养物质外，还必须添加植物激素。为了防止杂菌污，在操作过程中必须保证无菌。

（4）基因型为yyRr的玉米品种产生的花粉的基因型为yR和yr；基因型为YyRr玉米品种产生的花粉的基因型为YR、Yr、yR和yr；两个品种的花粉进行原生质体融合后，若仅考虑两两融合，则最多可产生9种基因型的融合细胞：YYRR、YYrr、yyRR、yyrr、YyRR、YYRr、YyRr、Yyrr和yyRr。这些融合细胞再经培养可以得到的玉米新品种中，YYRR、YyRR、YYRr和YyRr的表现型与亲本YyRr的表现型相同；yyRR和yyRr与亲本yyRr的表现型相同；YYrr和Yyrr表现型均为Y_rr，但与亲本不同，yyrr的表现型也与亲本不同，即可以得到2种不同于亲本表现型的玉米新品种。（5）若把细胞中提取的相应核基因直接导入大肠杆菌内，指导合成的蛋白质不具备正常的功能，可能的原因有：①大肠杆菌为原核生物，其细胞无内质网、高尔基体，不能对分泌蛋白进行加工；②玉米花粉细胞壁上含有少量的蛋白质，是由核基因控制合成的，核基因结构中有不能编码蛋白质的内含子，不应该直接导入原核细胞。

【考点定位】植物细胞工程、基因的自由组合定律、基因工程。

【名师点睛】本题综合考查学生对植物体细胞杂交、基因工程的知识的识记和理解能力。解答本题需熟记并理解相关的基础知识、形成清晰的知识网络，并且尽可能与基因的自由组合定律、原核细胞与真核细胞的结构、分泌蛋白的合成与运输的知识建立联系。

25．

（1）碳源和能源

（2）BD（2分）

（3）灭菌（2分）

（4）D（2分）

（5）1．96×109

（2分）

（6）梯度稀释

（2分） 选择（2分）

菌落（2分）

【解析】

（1）葡萄糖为主要的能源物质，是一种含碳的有机物，因此该培养基的葡萄糖为微生物的生长繁殖主要提供碳源和能源。

（2）该培养基以尿素为唯一氮源，只有尿素分解菌才能在该培养基上生长繁殖，因此属于选择培养基；该培养基配方中加入了凝固剂琼脂，又属于固体培养基，即B、D项正确。

（3）在培养基上划线操作中，操作的第一步及每次划线之前都要灼烧接种环，其目的是对接种环进行灭菌，以防止杂菌污染。

（4）制备培养基的操作步骤是：b计算→d称量→c溶化→e灭菌→a倒平板，A、B、C三项均错误，D项正确。

（5）依题意可知：每克该土壤样品中的菌落数为[（121＋212＋256）÷3]×106/（10/100）≈1．96×109。

（6）分离土壤中分解尿素的微生物的实验流程包括：土壤取样、梯度稀释、样品涂布到选择培养基上、挑选菌落。

【考点定位】微生物的培养与应用。

26．（1）原油 选择

（2）平板划线法 稀释涂布平板法

（3）强

（4）干热灭菌 高压蒸汽灭菌 火焰

【解析】

试题分析：（1）欲筛选出能降解原油的菌株，培养基中应只含有原油而无其它碳源，不能降解原油的细菌在此培养基上不能生存，这类培养基属于选择培养基．

（2）分离纯化菌种时，需采用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，使聚集在一起的细菌细胞分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落，以便纯化菌种．

（3）降解原油能力越强的菌株，在菌落周围形成的分解圈越大．

（4）实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌（如接种环）、干热灭菌（如培养皿）、高压蒸汽灭菌（如培养基）等．无菌操作要求在整个实验过程中操作都在酒精灯火焰附近进行，以避免周围微生物的污染．

故答案为：（1）原油 选择

（2）平板划线法 稀释涂布平板法

（3）强

（4）干热灭菌 高压蒸汽灭菌 火焰

27．（1）调整pH 高压蒸汽灭菌 防止培养皿盖上的泠凝水落入培养基造成污染

（2）平板划线 4 稀释涂布平板

（3）不连续单个菌落 C

（4）溶解氧 营养物质

【解析】

试题分析：（1）培养基的制作过程主要有计算、称量、溶化、调节pH、灭菌、分装．培养基常用高压蒸汽灭菌法灭菌．倒平板时要待平板冷凝后，为防止培养皿盖上的泠凝水落入培养基造成污染，常常需要将平板倒置．

（2）据图分析，图①是在纯化过程中通过平板划线法得到的，图中经过了3次划线操作，需要对接种环进行4次灼烧灭菌．图②表示稀释涂布平板法接种得到结果．

（3）平板划线法接种时，经培养，在划线的末端出现不连续单个菌落表明该菌已分离．在此过程中，

A、接种环只需要蘸菌液一次，进行连续几次划线操作，A错误；

B、划线分离时，不能把接种环深入到培养基中进行接种，只能在培养基表面进行划线操作，B错误；

C、在超净平台中进行接种时，不能关闭过滤风，C正确；

D、划线时要将最后一区的划线不能与第一区的划线相连，D错误．

故选：C．

（4）该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养．结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快，原因振荡培养能提高培养液的溶解氧的含量，同时可以使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率．

故答案为：（1）调整pH 高压蒸汽灭菌 防止培养皿盖上的泠凝水落入培养基造成污染

（2）平板划线 4 稀释涂布平板

（3）不连续单个菌落 C

（4）溶解氧 营养物质

28．

（1）

①

淀粉 琼脂

② 菌落 ③

灼烧灭菌 液体 ④稀释涂布平板法 ⑤ 透明圈

（2）

火焰

（3）选择 鉴别

【解析】

（1）实验步骤：①筛选分离出能够高效分解淀粉的细菌需要使用以淀粉为唯一碳源的选择培养基，琼脂常常作为凝固剂制作固体培养基；

②将稀释后的土壤样品接种到已灭菌的培养基上，在恒温培养箱中培养一段时间后，培养基上出现许多菌落；

③金属的接种工具使用灼烧灭菌法灭菌．淀粉分解菌属于异养需氧型微生物，需要将其接种到液体培养基进行摇床震荡培养；

④淀粉分解菌的鉴定需要将其用稀释涂布平板法接种到已灭菌的培养基上；

⑤淀粉遇到碘液会变蓝色，在固体平板培养基上，淀粉分解菌能够将淀粉分解而使得以淀粉分

解菌菌落为中心的非蓝色的透明圈．出现透明圈的就是淀粉分解菌，经进一步纯化培养可达到实验目的；

（2）微生物培养的成功的关键是无菌操作，所以所有倒平板和接种操作，都应在超净台上酒精灯火焰附近进行。

（3）从用途分析，①所用培养基属于选择培养基，⑤所用培养基属于鉴别培养基。

【考点定位】微生物的分离和培养

【名师点睛】固体培养基用于分离菌种，液体培养基用于微生物的大量繁殖．鉴别培养基是指一类在成分中加有能与目的菌的无色代谢产物或反应物发生显色反应的指示剂，从而达到只须用肉眼辨别颜色就能方便的从近似菌落中找出目的菌菌落的培养基。选择培养基是指通过培养混合的微生物，仅得到或筛选出所需要的微生物，其他不需要的种类在这种培养基上是不能生存的．从土壤中分离目的微生物的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株。

29．

（1）平板划线法 单个 倒置

（2）NaNO3 尿素 葡萄糖 氮源 碳源 （要求：前后对应） 脲酶

（3）乙 1．16×109 少

（4） 灭菌

【解析】

（1）由图可知，其采取的是平板划线法，该方法能把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。接种后培养基应倒置放在37℃恒温培养箱中进行培养。

（2）培养分解尿素的细菌，其氮源是尿素，所以培养基中要除去含氮物质，即去除NaNO3，并加入尿素和葡萄糖，以提供氮源和碳源。尿素分解菌能合成脲酶将尿素分解为氨，使培养基pH发生改变，酚红由黄变红，使菌落周围呈现红色，所以培养基中要加入酚红作指示剂。

（3）甲同学只涂布了1个平板，实验数据说服力不够

丙同学其中一个平板的计数结果与另两个相差太远，说明操作过程出现错误，数据缺乏正确性，所以乙同学的统计结果是相对准确可信的。在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为23．4，那么每毫升样品（涂布平板时所用稀释液的体积为0．2mL）

中的菌落数是=106×23．2×1/0．2=1．16×109个。当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察的是一个菌落，因此用这种方法测定得密度偏低。

（4）实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理后，才能倒掉。

【考点定位】微生物的分离和培养、测定某种微生物的数量

【名师点睛】微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。若要对微生物进行取样计数，接种方法只能是稀释涂布平板法。稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养．培养基的营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。

30．

（1）垃圾场（合理给分）

（2）梯度稀释；菌落

（3）选择；稀释涂布平板法；碳源、氮源；凝固剂（或琼脂）

（4）单核期；完全未开放的花蕾 生长素和细胞分裂素

（5）高压蒸汽灭菌；酒精灯火焰旁

【解析】

（1）要分离出能分解特定物质的目的菌，应该在富含该物质的场所进行取土，一般垃圾场塑料袋较多。

（2）从“目的是使聚集在一起的微生物分散成单个细胞”可推知，土壤悬浮液应进行一系列浓度梯度的稀释。在培养皿中可得到由单个细菌形成的菌落。

（3）Ⅰ号培养基能筛选出分解聚乙烯塑料的目的菌，所以Ⅰ号培养基从功能上属于选择培养基。图中接种的方法经历多次浓度稀释，所以接种方法为稀释涂布平板法。Ⅱ号培养基的目的是使目的菌数目增多，即扩大培养，所以培养基中除了水和无机盐外，还应加入氮源和碳源等营养成分。一般扩大培养用的是液体培养基，所以不需要添加凝固剂（或琼脂）。

（4）月季的花药离体培养，一般选择单核期的花药进行培养，从宏观上分辨，一般选择完全没有开放的花蕾。植物组织培养所用的培养基一般要加入的主要激素是生长素和细胞分裂素。

（5）培养基在接种前要用高压蒸汽进行灭菌，完成实验后为了防止杂菌污染，还要用高压蒸汽进行灭菌，并且接种时为了防止空气的杂菌污染培养基，应在酒精灯火焰旁进行。

【考点定位】微生物的分离和培养

【名师点睛】

（1）无菌操作技术有消毒和灭菌，消毒有煮沸消毒法、巴氏消毒法和化学药剂消毒法，灭菌有灼烧灭菌法适用于接种工具、干热灭菌法适用于玻璃器皿和金属工具、高压蒸汽灭菌法适用于培养基及容器的灭菌。

（2）接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法。

（3）植物组织培养是指利用特定的培养将离体的植物细胞、组织或器官培养成完整植株的过程。花药的离体培养、基因工程中的受体细胞的培养、植物体细胞杂交后杂种细胞的培养以及植物的大量快速繁殖都要用到植物组织培养技术。