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1.PCR技术简介:PCR是一种体外迅速扩增DNA片段的技术,它能以极少量的DNA为模板,在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝。这项技术有效地解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行分析研究的问题,被广泛的应用于遗传疾病的诊断、刑侦破案、古生物学、基因克隆和DNA序列测定等各方面。2.细胞内参

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课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段优秀教案说课稿

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1.PCR技术简介

:PCR是一种体外迅速扩增DNA片段的技术,它能以极少量的DNA为模板,在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝。这项技术有效地解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行分析研究的问题,被广泛的应用于遗传疾病的诊断、刑侦破案、古生物学、基因克隆和DNA序列测定等各方面。

2.细胞内参与DNA复制的各种组成成分及其作用

①解旋酶:打开DNA双链

②DNA母链:提供DNA复制的模板

③4种脱氧核苷酸:合成,子链的原料

④DNA聚合酶:催化合成DNA子链

⑤引物:使DNA聚合酶能够从引物的3端开始连接脱氧核苷酸(引物是一小段DNA或RNA,它能与DNA母链的一段碱基序列互补配对。用于PCR的引物长度通常为20—30个核苷酸)

3.DNA的合成方向

DNA的两条链是反向平行的,通常将DNA的羟基末端称为3端,而磷酸基团的末端,,称为5端。DNA聚合酶不能从头开始合成DNA,而只能从3端延伸DNA链,因此,DNA,复制需要引物。当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后,DNA聚合酶就能从引物的3,,端开始延伸DNA链,DNA的合成方向总是从子链的5端向3端延伸。

4.PCR的反应过程

PCR一般要经历三十多次循环,每次循环可以分为变性(当温度上升到90oC以上时,双链DNA解聚为单链)、复性(温度下降到50oC左右,两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合)和延伸(温度上升到72oC左右,溶液中的四种脱氧核苷酸在DNA聚合酶的作用下,根据碱基互补配对原则合成新的DNA链)三步。从第二轮循环开始,上一次循环的产物也作为模板参与反应,并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链会与引物Ⅱ结合,进行DNA的延伸,这样,DNA聚合酶只能特异的复制处于两个引物之间的DNA序列,使这段固定长度的序列成指数扩增。

5.PCR技术与DNA的复制

PCR反应是通过控制温度使DNA复制在体外反复进行。PCR反应的实质就是DNA复制,所以有关PCR反应的题目与DNA复制的原理相同,计算方法也大体相同。例如:PCR反应中的目的片段一般以2n的方式积累,其中n为反应循环次数。一个DNA片段在30次循环后反应物中大约有10亿个这样的片段。(230)

【课堂探究】P63练习

1.提示:绘图可参考教科书中图5-9。PCR反应中的目的片段一般以2n的方式积累,其中n为反应循环次数。一个DNA片段在30次循环后反应物中大约有10亿个这样的片段(

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