课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教案评析

班级________

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Hw2015级sw

导学提纲选修2-2-1 专题2 微生物的培养与应用

课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

【学习目标】1、记住选择培养基的概念、筛选微生物的实例、原理。

2、记住统计菌落数目的方法

3、会写出分解解尿素的细菌分离的实验过程及注意事项

【学习重点】对土样的选取和选择培养基的配制

【学习难点】对分解尿素的细菌的计数

【学习过程】

一、基础知识

(一)筛选菌株

1、

自然界中目的菌株的筛选

①原理：根据目的菌对 的要求，到相应的环境中去找。

②实例：DNA多聚酶链式反应（PCR）是一项 的技术，要求使用 。能产生耐高温的TaqDNA聚合酶的 就是从热泉中筛选出来的

2、实验室中微生物筛选的原理

人为提供有利于________生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时________或________其他微生物生长。

3、分解尿素的细菌的分离原理

尿素是一种农业 ，只有被 分解成 之后，才能被植物吸收利用。

土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们体内能合成________，将尿素分解的反应式是_________________________________________。

4、选择培养基

在微生物学中，将允许__________种类的微生物生长，同时________或________其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。

【思1】阅读教材P22的第一、二段内容以及小字部分，完成相应问题

（二）统计菌落数目

常用来统计样品中活菌数目的方法是 。即当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的 。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板进行计数。测定微生物数量的常用方法还有 直接计数.

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导学提纲选修2-2-1 一般来说，统计的菌落数往往比活菌的实际数目 。这是因为 。因此，统计结果一般用 而不是活菌数来表示。

（三）设置对照

1、设置对照的主要目的是排除实验组中 对实验结果的影响，提高实验结果的 。

【思2】分析A同学的结果出现的可能原因？如何设置对照排出影响因素？

二、实验设计

1、实验流程

2、实验设计

包括的内容有： 、 、 和 ，具体的实验步骤以及时间安排等的综合考虑和安排。

3、实验步骤

（1）土壤取样：土壤有 之称，土壤中微生物 ，在 表层，有更多的微生物生长，土壤中的微生物大约 是细菌，细菌适宜生活在 取样：从肥沃、湿润的土壤中，用无菌小铁铲铲去表层土取距地表约 的土壤层. （2）样品稀释

稀释原因：样品稀释程度直接影响 ，

稀释标准：选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在 ，适于计数的平板

稀释倍数：测定细菌：选用稀释 倍

，测定放线菌：选用稀释 倍 测定真菌：选用稀释 倍

【思3】为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？

（3）微生物的培养与观察

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导学提纲选修2-2-1 培养：不同种类的微生物，往往需要不同的培养 和培养 。

细菌： 放线菌： 真菌： 观察：在实验过程中，一般每隔 统计一次 数目，选取菌落数目 的记录作为结果，这样可以 。

菌落特征包括 （4）细菌的计数

为了保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板进行计数。在某一稀释度下，至少对 个平板进行重复计数，然后求出 ，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。

三、操作提示

1、无菌操作

（1）取土样用的小铁铲和盛土样的信封在使用前都要________。

（2）应在________旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入________中，塞好棉塞。

（3）在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在________旁操作。

2、做好标记

（1）实验时要对________做好标记。注明____________________________等。

3、制定计划

（1）为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当_______________。

例如：第一天 第二天 第三天 四、

结果分析与评价

内容

有无杂菌污染的判断

选择培养基的筛选作用

样品的稀释操作

重复组的结果

结论分析

对照的培养皿中________菌落生长→未被杂菌污染

菌落形态多样，菌落数偏高→培养物中混入____________ 牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目________选择培养基的数目→选择培养基具筛选作用，已筛选出一些菌落

得到2个或2个以上菌落数目在________的平板→操作成功，能进行菌落的计数

若选取同一种土样，统计结果应________；如果结果相差太远，说明实验操作过程中出现操作失误，需要找出产生差异的原因

五、课题延伸（分解尿素的细菌的进一步鉴定）

1、原理

CO(NH2)2＋H2OCO2＋2NH3，在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的________将尿素分解成了________。氨会使培养基的碱性增强，________升高。因此，我们可以通过检测培养基____________来判断该化学反应是否发生。

2、鉴定

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导学提纲选修2-2-1 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入________指示剂，培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂将________，这样，我们就可以准确地鉴定该种细菌能够分解尿素。

【当堂巩固】

1、下列叙述错误的是(

) A．因为土壤中各类微生物的数量不同，所以，为获得不同类型的微生物要按不同的稀释倍数进行分离

B．测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围不同

C．只有得到了3个或3个以上菌落数目在30～300的平板，才说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数

D．牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落

2、在做“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验时，甲组实验用氮源只含尿素的培养基，乙组实验用氮源除尿素外还含硝酸盐的培养基，其他成分都相同，在相同条件下操作，培养与观察，则 组实验属于对照组。

3、分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是(

) ①加尿素

②不加尿素

③加琼脂

④不加琼脂

⑤加葡萄糖

⑥不加葡萄糖

⑦加硝酸盐

⑧不加硝酸盐

A．①③⑤⑦ B．②④⑥⑧C．①③⑤⑧ D．①④⑥⑦

4、下列有关微生物培养的叙述，不正确的是（ ）

A．测定土壤样品中的细菌数目，常用稀释涂布平板法进行菌落计数

B．在对微生物进行培养前，需要对微生物和培养基进行灭菌

C．酵母菌发酵过程产生的酒精，对其他微生物生长有一定的抑制作用

D．分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源

5、欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，下列实验操作中不正确的是

A．将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释

B．同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板

C．可将未接种的培养基在相同条件下作为对照进行培养

D．用加入双缩脲试剂的培养基可筛选出分解尿素的细菌

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