课题3　血红蛋白的提取和分离优秀教案范文

专题5DNA与蛋白质技术

课题5.3血红蛋白的提取和分离

一、【课题目标】

(一)知识与技能

1、尝试从血液中提取和分离血红蛋白

2、了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理

二)过程与方法

体验血红蛋百提取和分离的实验的严格要求，注意按照操作提示进行

步骤

三)情感、态度与价值观

初步形成科学的思维方式，发展科学素养和人文精神

二

【课题重点】

凝胶色谱法的原理和方法

三、【课题难点】

样品的预处理:色谱柱填料的处理和色谱柱的装填

四、【教学方法】

启发式教学

五、【教学工具】

多媒体课件

六、【教学过程】

(一)引入新课

(二)进行新课

1.基础知识

蛋白质的物化性质

1.1凝胶色谱法(分配色谱法) 1)原理;分子量大的分子通过多孔凝腔短，流动快;分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路径长，时间长后洗脱出来

(2)凝胶材料:多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、

(3)分离过程:(图5-13b) 混合物上柱一洗脱一大分子流动快、小分子流动慢一收集

太洗脱:从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的

1.2缓冲溶液

(1)

原理:由酸和相应的强碱弱酸盐组成(如iH＂S- Nac，

Nall，

PO4/Na，

HPC，等，

(2)

缓冲液作用抵制外界酸、碱对溶液的酸碱性状改变而保持出稳定的量

(3)分离方法:凝胶电述、聚丙烯胺经胶电泳

2，实险设计

2.1蛋白质的提取和分离一般分为哪些基本步骤? 样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定。

思考:是否所有种类的纸白质的提取和分离都是这样的?为什么? 不是。因为蛋白质的来源和性质不同，分离方法差别根大。

2.2选择实验

(1)你认为鸟类血液和乳动物血液中，最好哪种血液来提取血红蛋白? 为什么? 乳动物血液。因为该细胞中没有细胞核，血红蛋白含量高。

(2)请阅读教村，认识哺乳动物血液组成及血红蛋白性质。并思考回答下

问题

血液由和

两部分组成。

血用胞中

细胞数量最多，细胞的含量最高的化合物是

该化和物是由

和CO2结合

构成的，其中每个亚基中都含有一个能与O2 除去血蛋自的杂蛋白，有利于后步骤的分离纯化

2.3 红细胞的洗涤过程为

血液十柠檬酸钠一低速短时离心→吸出上层血→红细胞+5倍体积生理盐

水→低速离心重复

水一缓慢持10min低速短时离心一吸出上清液一反复洗涤直至上清液无黄

思考:加入柠橡酸钠有何日的?为什么要低速、短时离心?为什么要缓慢

防止血液凝固:防止白细胞沉淀:防止红细胞破裂释放出血红蛋白。

思考:你有什么方法将红细胞中的血红蛋白释放出来? 加入蒸馏水，用玻璃棒快速搅掉一段时间。

:加入蒸馏水后红细胞液体积与原血液体积要相回。加入甲苯的目的是

红细胞混合液中长时离心(2000in×

Omin)一滤纸过滤除去脂

2.4如何除无机盐离子和小分子有机物质呢? 透析、半透限的选择透过性，大分子物质不能通过半透膜，离子和小分子能

够通过半透膜。

在此过程中:血红蛋自溶液中的离子和小分子不断通过半透膜扩散进入到

pl＝7的酸线冲液中。

思考:为何使用p＝7的酸缓冲液?为什么缓冲液量远多于血红蛋白溶液

维持血红蛋白的正常特性。有利于杂质分子充分地向外扩散。

2.5凝胶色谐分离蛋自质包括:制作色谱柱、装填色谱柱、样品加入和洗脱

根据教材图5＝1，读出制作色谱柱要的材料

色柱的制作过程，准备村料＝加工橡皮塞

色柱的装填。请阅读教材

、

样品加入和洗脱。其基本过程是

调节缓冲液面一加入蛋白质样品一调节缓冲液面一洗脱一收集分装蛋白

至此，血红蛋白即可得到粗分离。

在整个操作过程中，应当注意以下事项

(1)红细胞的洗涤: 洗涤次数不能过少:低速、短时离心。

(2)凝胶的预处理: 沸水溶法时间短，还能除去微生物和气泡

(3)色谱柱的装填

装填尽量紧密，降低颗粒间:无气泡:洗脱液不能断流。

（4）色请柱成功标志:红色区带均匀一致地移动。

三)课堂总结、点评

四)实例探究

什么样的蛋自质先洗脱出来() A相对分子质量大的

B.溶解度高的

C.相对分质量小的

(五)巩固练习

1.凝胶色谱法分离蛋白质的依据是() A.对其他分子的亲和力

B.溶解度

C.所带电荷多少

D.相对分子质量的大小

2.凝胶色谱法中所用的凝胶化学本质大多是() A.糖类化合物

B.脂质

C.白质

D.核酸

3.选用红细胞作为分离蛋白质的实验材料，有何好处() A.血红蛋白是有色蛋白

B.红细胞无细胞核

C.红细胞蛋白质含量高

D.红细胞DNA含量高

4.将搅排好的混合液离心来分离血红蛋白溶液时，第二层是( A.甲苯

B.血红蛋白水溶液

C.脂溶性物质的沉淀层

D.其他杂质的沉淀