课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教案设计（一等奖）

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

1.如何寻找目的菌株？

2.实验室中进行微生物筛选的原理是什么？

3.分离土壤中能分解尿素的细菌应配制怎样的培养基？

4.什么是选择培养基？

5.显微镜直接计数法测定微生物数量的原理和优缺点分别是什么? 6.稀释涂布平板法测定微生物数量的原理和缺点分别是什么? 7.设置对照实验的主要目的是什么？

8.土壤为什么被称为“微生物的天然培养基”？

9.每个稀释度下为什么需要3个选择培养基？

10.分离土壤中能分解尿素的细菌时，为什么也要将菌液接种到牛肉膏蛋白胨培养基上？

11.为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？

12.分离土壤中分解尿素的细菌时，要注意哪些无菌操作？

13.如何鉴定能分解尿素的细菌？

14.如何测定饮水中大肠杆菌数量？

参考答案

1.寻找目的菌株时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。

2.实验室微生物的筛选原理是人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。

3.分离土壤中能分解尿素的细菌应配制尿素作为唯一氮源的培养基，因此，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。

4.在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。

5.显微镜直接计数法是利用血球计数板在显微镜下直接计数，计数板上的计数室边长1mm，深度0.1mm，体积0.1mm3，通过测定一个计数室内的微生物数量，换算得到1ml菌液中的微生物数量。本计数方法的优点是直观、迅速，缺点是误差较大、不能区别活菌与死菌、不适合细菌计数（太小）。

6.稀释涂布平板法测定微生物数量（也叫活菌计数法或间接计数法）的原理是：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约有多少活菌。为了保证结果准确，一般选用菌落数在30~300的平板进行计数。本方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。

7.设置对照实验的主要目的是：排除实验组中非测试条件（实验操作、培养条件等无关变量）对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。

8.同其他生物环境相比，土壤中的微生物，数量最大，种类最多，在富含有机质的土壤表层，有更多的微生物生长，因此，土壤有“微生物的天然培养基”之称。

9.每个稀释度下需要3个选择培养基，遵循实验设计的平行重复原则，增强实验的说服力与准确性。

10.牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。稀释相同倍数的菌液，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目。

11.因为土壤中各类微生物的数量(单位：株/kg)是不同的，例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2 185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。因此，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择

培养的条件。

测定土壤中细菌的数量，一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养；测定放线菌的数量，一般选用103、104和105倍稀释液；测定真菌的数量，一般选用102、103和104倍稀释液。

12.分离土壤中分解尿素的细菌时，应注意以下无菌操作：①取土用的小铁铲和盛土样的信封在使用前都需要灭菌；②应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞；③在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作；④涂布平板的所有操作在火焰附近进行。

13.鉴定能分解尿素的细菌的方法：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。

14.测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到伊红-美蓝培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过计算得出水样中大肠杆菌的数量。