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课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课堂实录及点评｜教案在线预览

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正文

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

绵竹市南轩中学邓飞

研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。

二、课题重难点

课题重点：对土样的选取和选择培养基的配制。

课题难点：对分解尿素的细菌的计数。

三、材料分析

实验材料：土壤

实验药品：KH2PO4、Na2PO4

、MgSO4.7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂

5%HCI 5%NaOH PH试纸蒸馏水 70%酒精棉球灭过菌制备好的牛肉膏蛋白胨培养基平板

实验器具：锥形瓶、试管、涂布器、培养皿（套装）、酒精灯、天平、量筒、烧杯、棉塞、高压蒸汽灭菌锅、移液器、牛皮纸、橡皮筋、超净台

四、课时安排（本课题分3个课时进行）

第1课时：基本概念分析、实验设计

第2课时：培养基配制、样品稀释涂布

第3课时：分析交流讨论

五、方法步骤

1、制备选择培养基

（1）实验药品和器材

（2）溶解

（3）分装培养基

（4）培养基和培养皿的灭菌

2、在超净工作台上进行倒平板并接种

3、微生物的培养与观察

（1）在恒温培养箱中进行恒温培养

（2）观察

六、实验操作中的注意事项

1、

全程要求无菌操作：操作环境、器材等要灭菌。

2、

土壤取样：经常施尿素的地方，雨后收集或提前给泥土浇水，绝大数细菌分布在距地表约3——8cm土壤层，取样时用已灭菌的小铲铲去表土3cm. 3、

制备培养基：分别制备选择培养基，牛肉膏蛋白胨培养基（老师课前准备好）

4、

样品的稀释和涂布：各个细节均需保证无菌（为本节课学生练习的重点）

1）土壤的称取、稀释，每一步都要在火焰旁操作。操作中试管口和移液管应在离火焰1—2cm处。整个操作过程中使用一支移液管，不要接触任何其他物体。

2）涂布：

①

取0.1ml菌液（约滴2滴）

②涂布器末端先浸在体积分数为70﹪的酒精中，取出时要让多余的酒精在烧杯中滴尽，再在火焰上引燃，拿开让酒精燃尽后冷却8—10s才使用，操作中注意不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。

③同一个稀释度下应涂布4个培养皿（其中3个选择培养基，1个牛肉膏蛋白胨培养基），全部做需涂布21个培养皿（其中一个空白对照），因此，每个培养皿要做好编号，培养基的种类、培养日期以及稀释度等。

5、

微生物的培养与观察

1）

培养：30℃培养较好

2）

观察：课后间隔24小时观察1次，计数菌落数量，照像。

3）

检测培养基pH变化：加入酚红指示剂，也可直接用pH试纸。

4）

统计实验结果：注意选取菌落数介于30－300个之间的平板进行计数，且重复的结果要有相近性。

6、实验结束后，各种器材，药品都应进行严格灭菌，以防杂菌污染环境或对人员造成伤害。

七、实验教学设计思路及说明

本实验考虑到学校学生班级较多，实验器材和超净工作台有限，故采取学生分组、分工完成整个实验过程。如制备培养基的时候可以多个小组分工合作共同制备1000ml的培养基，这样既节约了药品又节约了时间；倒平板过程非常重要注意的细节比较多，所以要求每个同学都完成一个倒平板操作；接种由于培养皿有限，所以组内分工进行划线接种和稀释涂布接种，三人接种同一稀释度菌液相互形成平行实验。

在学生实验结果中选择较好的平板进行封口并低温保存以便其他学生观察。

资料摘要

课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课堂实录及点评