复习与测试第一课时评课稿

微生物的培养与应用

考点1

微生物的实验室培养

一、基础突破——抓基础，自主学习

1．培养基

(1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。

一般都含有水、碳源、氮源、无机盐(2)成分：还要满足不同微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求

(3)分类：按照物理性质可以分为液体培养基和固体培养基。

2．无菌技术

(1)含义：培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。

(2)关键：防止外来杂菌的污染。

(3)无菌技术的方法

巴氏消毒法、①消毒化学药剂消毒法、紫外线消毒法灼烧灭菌、②灭菌干热灭菌、高压蒸气灭菌煮沸消毒法、

3．大肠杆菌的纯化培养

(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基过程：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。

(2)纯化大肠杆菌的原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，形成单个菌落，此菌落是由一个细胞繁殖而来的子细胞群体。

(3)微生物的常用接种方法：平板划线法和稀释涂布平板法，接种过程仍然是无菌操作。

4．菌种的保存方法：

(1)对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。

(2)对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。

二、重难突破

1．消毒和灭菌的比较

项目

消毒

条件

较为温

结果

仅杀死物常用方法

煮沸消毒法

应用范围

日常用品

和的物

理或化

学方法

体表面或内部的部

分对人体有害的微生物

杀死物体巴氏消毒法

不耐高

温的液体

用酒精擦拭双

手，用氯气消

毒水源

接种工具

玻璃器皿、金属工具

培养基及容器的灭菌

化学药剂

消毒法

灼烧灭菌法

干热灭菌法

高压蒸汽灭菌法

灭菌

强烈的理化因素

内外所有的微生物，包括芽孢和孢子

2.纯化培养方法

方法

平板划线法

通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散原理

到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，即菌落

优点

缺点

适用

范围

[特别提醒]

(1)分离微生物所用的选择培养基一定是固体培养基，因为菌落只能在固体培养基上形成。

(2)平板划线法只适用于微生物的提纯，不适用于微生物的计数，并且在最后一次划线末端处的菌种最纯，进行平板划线应注意如下操作：

①每次划线之前都需要灼烧接种环灭菌。

②灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。

③划线时最后一区域不要与第一区域相连。

(3)倒平板的温度一般在50 ℃左右，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。

(4)平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又防止皿盖上的水珠落入培养基，造成培养基污染。

可以观察菌落特征，对混合菌进行分离

不能计数

适用于好氧菌

稀释涂布平板法

将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落

可以计数，可以观察菌落特征

较麻烦，平板不干燥效果不好

适用于厌氧菌和兼性厌氧菌

三、题型突破

1．下列依次表示倒平板、接种的位置，以及划线法接种的路径示意图，其中错误的是(

)

答案：D 2．有关平板划线操作不正确的是(

) A．将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红

B．接种环在平板上划线位置是随机的

C．在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过火焰

D．最后将平板倒置，放入恒温箱中培养

答案：B 3．(2017·北京海淀模拟)用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时(

) ①都需要用固体培养基

②都需要使用接种针进行接种

③都需要在火焰旁进行接种

④都可以用菌落数来计数活菌

A．①②

C．②④

答案：B 4．(2017·湖南岳阳质检)无菌操作是微生物接种技术的关键。传统发酵技术和微生物分离、纯化、应用过程及植物组织培养和动物细胞培养过程中，均要无菌操作。回答下列相关问题：

(1)消毒和灭菌是两个不同的概念，灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远丧失生长繁殖的能力。消毒仅指杀死一部分对人体有害的病原菌而对被消毒的物体基本无害。下列哪些事物适用于消毒处理________。

①皮肤

②饮用水

③牛奶

④注射器

⑤培养皿

⑥接种环

⑦培养基

⑧果汁

⑨酱油

⑩手术刀

A．①②③⑧⑨

C．①②③④⑤⑥⑧

B．④⑤⑥⑦⑩

D．以上全部

B．①③

D．③④

(2)如图是利用________法进行大肠杆菌接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。为达到这一目的，操作上应注意：

①每次划线前要________________________________________________；

②冷却后从上一区划线________开始划；

③首尾区________。

(3)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对固体培养基应采用的检测方法是____________________________，观察培养基上是否有菌落产生。

(4)有位同学在家制作泡菜时，为避免杂菌污染而向泡菜坛中加入了青霉素，结果发酵失败，原因可能是_________________________________________________________ ________________________________________________________________________。

答案：(1)A

(2)平板划线

①灼烧接种环

②末端

③不连接(不重叠)

(3)将未接种(或接种等量无菌水)的培养基在适宜的温度下放置适当时间

(4)青霉素杀死了乳酸菌

考点二

微生物的分离与计数

一、基础突破

1．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

菌种筛选

分离方法

实验流程

菌种鉴定

使用以尿素为唯一氮源的选择培养基

稀释涂布平板法

土壤取样→样品稀释→培养与观察→细菌的计数

以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂

2.分解纤维素的微生物的分离

二、重难突破

1．筛选微生物的两个实例比较

比较

项目

方法

土壤中分解尿素

的细菌的分离

利用以尿素为唯一氮源的选择培养基进行选择培养

分解纤维素的

微生物的分离

利用纤维素为唯一碳源的选择培养基进行选择培养

只有分解尿素的细菌能够合成脲酶，因为培养基中含有丰富的纤维素，因原理

才能在以尿素为唯一氮源的培养基上生长

在培养基中加入酚红指示剂，指示剂鉴定

变红说明尿素被分解，从而说明菌落中的菌体为分解尿素的细菌

[特别提醒]

筛选微生物的三种方法

(1)单菌落挑取法：利用平板划线法或稀释涂布平板法接种到固体平板培养基表面，直接根据微生物菌落的特征利用单菌落挑取的方法获得目的微生物。

(2)选择培养法：利用选择培养基对微生物进行选择培养，直接获得目的微生物。

(3)鉴定培养法：利用鉴别培养基使目的微生物菌落呈现特有的特征，然后筛选目的微生物。

2．微生物计数的两种方法

比较

项目

间接计数法

(稀释涂布平板法) 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生原理

长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌

每克样品中的菌落数：

(C÷V)×M

公式

C：某稀释度下平板上生长的平均菌落数；V：涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)；M：稀释倍数

当两个或多个菌体连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落

比实际值偏小

每毫升原液所含细菌数：每小格平均细菌数×400×10 000×稀释倍数

直接计数法

(显微计数法) 利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量

此能够分解纤维素的微生物具有更多的生存机会而大量繁殖

刚果红染色法，菌落周围出现红色消失的透明圈，该菌落为分解纤维素的微生物的菌落

缺点

结果

不能区分细胞死活

比实际值偏大

3.设置对照和重复

比较

项目

目的

对照

排除非测试因素对实验结果的影响

重复

排除偶然因素对实验结果的影响

实例

空白对照：确定培养基制作是否合格

同一稀释度涂布至少3个平板

[特别提醒]

“选择菌落数在30～300的平板”的两个提醒

(1)只得到1个菌落数在30～300的平板是错误的，原因是不符合实验的重复原则，易受到偶然因素的影响。

(2)得到3个或3个以上菌落数在30～300的平板，也不一定正确，原因是如果不同平板间差异较大，如得到3个平板，菌落数分别为230、34、240，虽然菌落数均在“30～300”，但由于34与另外两个平板差异较大，应找出原因并重新实验。

三、题型突破

1．(2017·江西宜春模拟)有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。下列叙述错误的一项是(

) A．在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以原油为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲，该培养基属于选择培养基

B．无菌技术要求实验操作应在酒精灯火焰附近进行，以避免周围环境中微生物的污染

C．为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈小说明该菌株的降解能力强

D．通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌

答案：C 2．(2014·高考新课标全国卷Ⅱ)为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：

(1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是___________________；

然后，将1 mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为________。

(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过________灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是_____________。

(3)示意图A和B中，________表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。

(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养，结果发现：振荡培

养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中________的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高________的利用率。

答案：(1)检测培养基平板灭菌是否合格

3.8×107

(2)灼烧

将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落

(3)B

(4)溶解氧

营养物质

3．(2017·山西四校联考)高温淀粉酶在大规模工业生产中是极为重要的酶制剂。研究者从热泉中筛选出了能高效产生高温淀粉酶的嗜热菌。其筛选过程如图所示。

(1)进行①过程的目的是________嗜热菌培养液；②过程所使用的接种方法是________。

(2)Ⅰ、Ⅱ号培养基配制和灭菌时，灭菌与调节pH的先后顺序是________；对培养基常用________方法进行灭菌。对于空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能________，如果要检测灭菌是否彻底，可以采用的方法是：将灭菌过的培养基在适宜的温度下放置一段时间，________________________。

(3)部分嗜热菌在Ⅰ号培养基上生长时可释放________分解培养基中的淀粉，在菌落周围形成透明圈；应挑出透明圈________(填“大”或“小”)的菌落，接种到Ⅱ号培养基。

答案：(1)稀释

稀释涂布平板法

(2)先调节pH，后灭菌

高压蒸汽灭菌

损伤DNA的结构

观察培养基上是否有菌落产生

(3)淀粉酶

大

随堂巩固

判断下列说法是否正确

1．培养基分装到培养皿后进行灭菌。(×) 2．从有机废水中分离分解有机物的微生物时，接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养。(×) 3．无菌操作的对象只要是没有生物活性的材料(如培养基、接种环等)都可采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。(×) 4．对细菌进行计数只能采用稀释涂布平板法，而不能用平板划线法。(×) 5．分解尿素的细菌在分解尿素时，可以将尿素转化为氨，使得培养基的酸碱度降低。(×) 6．刚果红可以与纤维素形成透明复合物，所以可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。(×) 7．刚果红染色法只能在培养微生物的时候加入刚果红。(×)