课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优秀说课稿

专题二课题2

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

学习目标

研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。

学习重点与难点

重点：对土样的选取和选择培养基的配制。

难点：对分解尿素的细菌的计数。

自主探究

1．尿素只有被

分解成

之后，才能被植物吸收利用。

2．以土壤中能分解尿素的细菌为研究对象，要达到的两个主要目的是：

⑴

；⑵

。

研究思路

一、筛选菌株

3．PCR（

）是一种在体外将

。此项技术的自动化，要求使用耐高温的DNA聚合酶。

思考：怎样找耐高温的酶呢？

4．实验室中微生物的筛选应用的原理是：人为提供有利于

生长的条件（包括等），同时抑制或阻止其他微生物生长。

5．选择培养基是指

。

二、统计菌落数目

6．常用来统计样品中活菌数目的方法是

。即当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的

。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在

的平板进行计数。

7.统计的菌落往往比实际数目

，原因是

三、设置对照

8．比较教材中两位同学的操作方法，哪位同学的结果接近真实值？你认为这两位同学的实验需要改进呢？如需要，如何改进？

9．设置对照实验的主要目的是

，提高实验结果的可信度。实验设计

10．实验设计包括的内容有：

、

、

和

，具体的实验步骤以及时间安排等的综合考虑和安排。

11.具有天然培养基之称的是

12.土壤中的微生物大约

是细菌，绝大多数分布在

土壤层中。

13.直接影响平板上生长菌落数目的是

。

14．不同种类的微生物，往往需要不同的培养

和培养

。

培养温度

培养时间

细菌

放线菌

霉菌

在实验过程中，一般每隔24小时统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以

。

操作提示

一、无菌操作：

15．本课题无菌操作应注意什么问题？

二做好标记

16．在进行多组实验过程中，应注意做好标记，其目的是

。

思考：应标记哪些内容？怎样操作更有利于实验的进行？

三、制订计划

17．为什么要制订计划？

四、结果分析与评价

18.回答其中的问题

五、课题延伸

19.细菌合成的脲酶将尿素分解为

，，造成培养基

升高。在以尿素为唯一氮源的培

养基中加入

，若指示剂变红，可以初步鉴定该细菌

。

知识链接：

1．选择培养基

选择培养基的含义是：在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进需要的微生物的生长。目的是从众多微生物中分离所需要的微生物。

在培养基中加入某种化学物质可以做到这一点，如加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。这里的加入是在培养的培养成分的基础上加入的。

培养基中的营养成分的改变也可达到分离微生物的目的。如培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物，因为非固氮微生物不能在此培养基上生存。当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。如石油是唯一碳源时，可以抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，达到分离能消除石油污染的微生物的目的。改变微生物的培养条件，

也可以达到分离微生物的目的，如将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物。

2．如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？

统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的平均值，然后按课本旁栏的公式进行计算。

3．为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？

这是因为土壤中各类微生物的数量（单位：株/Kg）是不同的，例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧型细菌数约为2185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。因此，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。

巩固提升

一、选择题

1．PCR技术要求使用耐高温的DNA聚合酶，这种酶要能忍受93℃左右的高温。如果请你来寻找这种耐高温的酶，你会去哪里寻找(

)

A．土壤中

B．海水中

C．热泉中

D．冷库中

2．下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是

(

)

A．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、葡萄糖、尿素、琼脂、水

B．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、葡萄糖、琼脂、水

C．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、尿素、琼脂、水

D．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水；

3.某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234，那么每克样品中的菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL)(

)

A．2.34×108

B．2.34×109

C．234

D．23.4 4.在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的结果产生原因可能有(

)

①由于土样不同

②由于培养基污染

③由于操作失误

④没有设置对照

A．①②③

B．②③④

C．①③④

D．①②④

5.关于土壤取样的叙述错误的是(

)

A．土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤

B．先铲去表层土3cm左右，再取样

C．取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌

D．应在火焰旁称取土壤

6.下列关于从土壤中分离细菌的操作步骤中，正确的是(

)

①土壤取样

②称取10g土壤取出加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中

③吸取0.1mL进行平板涂布

④依次稀释至101、102、103、104、105、106、107稀释度

A．①→②→③→④

B．①→③→②→④

C．①→②→④→③

D．①→④→②→③

7.下列关于测定土壤中细菌数量的叙述，正确的是(

)

A．一般选用103～107倍的稀液分别涂布

B．测定放线菌的数量，一般选用103、lO 4和105倍稀释

C．测定真菌的数量，一般选用103、104和105倍稀释

D．当第一次测量某种细菌的数量，可以将101～107倍的稀释液分别涂布到平板上培养

8.下列关于微生物的培养叙述错误的是(

)

A．细菌一般在30～37℃的温度下培养1～2 d

B．放线菌一般在25～28℃的温度下培养5～7 d

C．霉菌一般在25～28℃的温度下培养3～4 d

D．不同种类的微生物，一般需要相同的培养温度和培养时间

9.下列操作需要在火焰旁进行的一组是(

)

①土壤取样

②称取土壤

③稀释土壤溶液

④涂布平板

⑤微生物的培养

A．①②③④⑤

B．②③④⑤④⑤

C．③④⑤

D．②③④

10.下列可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是

(

)

A．以尿素为唯一氮源的培养基中加人酚红指示剂

B．以尿素为唯一氮源的培养基中加入二苯胺试剂

C．以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹Ⅲ试剂

D．以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂

11.土壤取样时最好选择哪种环境中的土壤做分离细菌的实验(

)

A．街道旁

B．花盆中

C．农田中

D．菜园里

二、非选择题

12.统计菌落数目一般用稀释涂布平板法，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个

，来源于样品稀释液中的一个

。计数时一般选择菌落数在

的平板计数。

13.在做本课题实验时，一位同学在稀释倍数为106的培养基中涂布了3个平板，统计的菌落数分别为21、212和256，该同学以这3个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。你认为这一结果是否接近真实值?如果需要改进，如何改进?

14.在进行操作本课题实验时应特别注意：

、

、

。

15．在做本课题实验时，甲同学筛选出的菌落与其他同学不同，并且他在设计实验时并没有设置对照。思考下列问题：

(1)你认为出现甲同学这种结果的原因可能是什么? (2)要帮助甲同学排除可能影响实验结果的因素，需要设置

，实验方案有两种：一种方案是可以由其他同学用与甲同学

进行实验，如果结果与甲同学一致，则证明甲同学

，如果结果不同，则证明甲同学存在操作

或

的配制有问题。另一种方案是将甲同学配制的培养基在不加

的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到

。

(3)由此问题你得出的启示是什么?

16．在105稀释度下求出3个平板上菌落数的平均值是63，那么每克样品中的菌落数是多少?

一、1．C

2．A

3．B

4．A

5．C

6．C

7．B

8．D

9．D

10．A

11．D 二、12．菌落

活菌

30～300

13．不接近真实值，需要重新实验。

14．无菌操作

作好标记

规划时间

15．(1)可能的原因有两种：一是由于土样不同，二是由于培养基污染或操作失误。

(2) 对照实验

一样的土样

，

无误，

失误

培养基

土样

污染。

(3)启示：做实验时一定要设置对照。

16．6.3×107。