课题3　血红蛋白的提取和分离教学设计和教学实录

若蛋白质的带电性质和数量相同，但蛋白质的分子大小不同，则蛋白质在电场中的迁移情况是 。叶绿体色素分离使用的支持物是 ，电泳分离蛋白质使用的支持物是 。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的迁移率完全取决于 。

二、实验操作

1.分析与样品处理有关的问题：

（1）分离红细胞离心速度不能过高和时间过长的原因是

。洗涤红细胞的目的①

是 。用生理盐水洗涤红细胞的原因②

是 。洗涤次数不能过少的原因是 ③

。洗涤成功的标志是 。

④

（2）在红细胞液中加入蒸馏水的目的是

，甲苯的作用是 ，充分搅拌的目的是 。

透析袋

（3）将血红蛋白从混合液中分离出来所使用的方法是 。A 右图是分离结果示意图，图中①②③④的物理性质分别B 是

，主要成分分别是 将血红蛋白从中分离出来要经过 过滤和 分离两步。

（4）右图装置用于 ，其目的是 。若B是血红蛋白溶液，则A是 。

2.以下是凝胶色谱柱的制作过程图解，正确的顺序是 ① 。

打孔

安装

玻璃管

挖出凹穴

a b c d e f

3.下图A是样品的加入示意图，图B是洗脱示意图。

e

样操样作品

品

压

a b c d

A B

（1）加样前需先让凝胶面上的缓冲液下降至与凝胶面平齐，操作方法是 。加样时正确的操作次序是 。

（2）洗脱液e是 ，洗脱时要打开 ，待 接近色谱柱底端时，用试管收集流出液。

（3）如何确定色谱柱的制作是成功的？ 。

【课前预习】

1.①较小②较长③较慢④较大⑤凝胶外部⑥较短⑦较快

2.①酸或碱②基本不变③带电性质的差异④大小⑤形状⑥迁移速度

3.①低速短离心②去除杂蛋白③蒸馏水和甲苯④甲苯、脂溶性物质、血红蛋白和沉淀物⑤分子量较小的杂质

【课堂探究】

一、1.（1）①蛋白质a的相对分子质量较小，蛋白质b的相对分子质量较大②b③较快④a（2）①蛋白质的形状、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力

2.①缓冲酸和碱对血浆pH的影响，维持血浆pH基本不变②是③利用配制的缓冲溶液模拟体内的pH环境

3.①带正电的蛋白质向阴极迁移，带负电的蛋白质向阳极迁移②向同一极迁移，但分子大迁移慢，分子小的迁移快③滤纸④凝胶⑤分子的大小

1.（1）①离心速度过高和时间过长会使白细胞等一同沉淀，达不到分离效果②去除杂蛋白，以利于后续步骤的分离纯化③生理盐水是等渗溶液，能够维持红细胞正常的形态④洗涤次数过少，无法除去血浆蛋白⑤上清液中没有黄色（2）①让红细胞吸水胀破②瓦解细胞膜③加速红细胞破裂（3）①离心②无色透明液体、白色薄层固体、红色透明液体、暗红色沉淀物③甲苯、脂溶性物质、血红蛋白、红细胞破碎物④滤纸⑤分液漏斗（4）①血红蛋白的粗分离②除去样品中分子量较小的杂质③20mol/L的磷酸缓冲液

2.①aebdcf

3.（1）①打开色谱柱下端的流出口②bcad（2）①20mmol/L的磷酸缓冲液②色谱柱下端的流出口③红色的蛋白质（1）①红色区带均匀一致地移动