复习与测试教案板书设计

微生物的培养与应用

1.（2016年•江苏卷）漆酶属于木质降解酶类，在环境修复、农业生产等领域有着广泛用途。下图是分离、纯化和保存产漆酶菌株的过程，相关叙述正确的是（多选）

A．生活污水中含有大量微生物，是分离产漆酶菌株的首选样品

B．筛选培养基中需要加入漆酶的底物，通过菌落特征挑出产漆酶的菌落

C．在涂布平板上长出的菌落，再通过划线进一步纯化

D．斜面培养基中含有大量营养物，可在常温下长期保存菌株

2.（2015年•江苏卷）做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是

A．高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖

B．倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上

C．为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落

D．用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上

3.（2014年•江苏卷）下图是高产糖化酶菌株的育种过程，有关叙述错误的是

．．

A.通过上图筛选过程获得的高产菌株未必能作为生产菌株

B.X射线处理既可以引起基因突变也可能导致染色体变异

C.上图筛选高产菌株的过程是定向选择过程

D.每轮诱变相关基因的突变率都会明显提高

4.（2013年•江苏卷）某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是

A.培养基分装到培养皿后进行灭菌 B.转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线

C.接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养 D.培养过程中每隔一周观察一次

5.（2015年•上海卷）在涂布有大肠杆菌的培养基上进行抑菌实验，在a、b、c处分别贴浸有不同抗生素（浓度相同）的无菌滤纸片，d处滤纸片浸有无菌水。培养后的结果如图。以下判断错误的是

．．A．a处抑菌效果小于b处

B．b处的滤纸片没有沥干

C．c处抗生素无效

D． d为对照

6.（2012年•大纲卷）关于细菌的叙述中，正确的是

A.不同种类细菌的生长均需要相同碳源

1

B.常用液体培养基分离获得细菌单菌落

C.细菌大量培养过程中，芽孢形成于细菌生长的调整期

D.培养基中含有高浓度NaCl有利于金黄色葡萄球菌的筛选

7.（2011年•重庆卷）下列有关细菌培养的叙述，正确的是

A.在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有多种细菌

B.在培养基中加入青霉素可抑制真菌而促进细菌生长

C.向液体培养基中通入氧气能促进破伤风杆菌的生长

D.在半固体培养基中接种细菌培养后可以观察其运动

8.（2009年•四川卷）下列关于几种微生物的营养代谢和生长繁殖的描述，正确的是

A.根瘤菌通过生物固氮，制造了含氮养料和含碳有机物

B.接种到培养基上的青霉菌，进入对数期能大量积累青霉素

C.培养液中溶氧量的变化，会影响酵母菌的生长繁殖和代谢途径

3232D.用P标记的噬菌体感染细菌，在新形成的噬菌体中都能检测到P 9.（2009年•安徽卷）下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是

A.用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板

456B.取10、10

、10倍的土壤稀释液和无菌水各0.1mL，分别涂布于各组平板上

C.将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24～48小时

D.确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数

10.（2007年•江苏卷）不同的微生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物的描述中，不正确的是

．A．氮源物质为该微生物提供必要的氮素

B．碳源物质也是该微生物的能源物质

C．无机盐是该微生物不可缺少的营养物质

D．水是该微生物的营养要素之一

11.（2006年•全国卷Ⅱ）用蔗糖、奶粉和经蛋白酶水解后的玉米胚芽液。通过乳酸菌发酵可生产新型酸奶，下列相关叙述错误的是

A.蔗糖消耗量与乳酸生成量呈正相关 B.酸奶出现明显气泡说明有杂菌污染

C.应选择处于对数期的乳酸菌接种 D.只有奶粉为乳酸菌发酵提供氮源

12.（2017年•江苏卷）(7分)苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害。小明同学准备依据下图操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株。请回答下列问题:

（1）酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作为碳源的有

。

（2）将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐_____ ，以达到富集

2

酚降解菌的目的。若上图平板中菌落过于密集，应进一步 ___，以便于菌落计数与分离。制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加______ ___。

（3）下图为连续划线法示意图，在图中_____（填图中序号）区域更易获得单菌落。

（4）采用比色测定法（使用苯酚显色剂）检测降解后的废水中苯酚残留量。先制作系列浓度梯度并进行显色反应，下表中1～5号比色管的苯酚浓度应分别为 。

如果废水为50 mg/ L苯酚溶液，降解后约有21%的苯酚残留，则需将残留液稀释_____（填序号：①5 ②10 ③20）倍后，再进行比色。

13.（2017年•新课标Ⅰ卷）某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。回答下列问题：

（1）有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生 。能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，原因是 ，但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是 （答出两点即可）。

（2）为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择 （填“尿素”、“NH4NO3”或“尿素+NH4NO3”）作为氮源，不选择其他两组的原因是 。

（3）用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有_________ ___ _ （答出两点即可）。

14.（2016年•浙江10月卷）回答下列（一）（二）小题

（一）请回答从土壤中分离产脲酶细菌和脲酶固定化实验的有关问题

（1）LB固体培养基：取适量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl，加入一定量的蒸馏水溶解，再加 ，灭菌备用。

（2）尿素固体培养基：先将适宜浓度的尿素溶液用 灭菌过的G6玻璃砂漏斗过滤，因为G6玻璃砂漏斗 ，故用于过滤细菌。然后将尿素溶液加入到已经灭菌的含有酚红的培养基中，备用。

-4-5（3）取适量含产脲酶细菌的10、10两种土壤稀释液，分别涂布接种到LB固体培养基-5和尿素固体培养基上，培养48h，推测固体培养基上生长的菌落数最少的是 (A. 10-5-4稀释液+尿素固体培养基 B. 10稀释液+LB固体培养基 C. 10稀释液+尿素固体培养基 -4D. 10稀释液+LB固体培养基)。在尿素固体培养基上产脲酶细菌菌落周围出现 ，

3

其原因是细菌产生的脲酶催化尿素分解产生 所致。

（4）制备固定化脲酶时，用石英砂吸附脲酶，装柱。再用蒸馏水洗涤固定化酶柱，其作用是 。

（二）某小组欲进行烟草原生质体分离与培养的研究。请回答：

（1）原生质体的分离：在无菌条件下，取烟草无菌苗的叶片，放入含有0.5mol/L甘露醇（维持较高渗透压）的___ ___混合液处理，经过离心纯化后获得原生质体。

（2）原生质体的培养：将原生质体进行培养，重新长出细胞壁，形成胚性细胞。此时，应该______培养基中甘露醇浓度，以利于胚性细胞继续培养形成细胞团，然后经两条途径形成再生植株。途径一：细胞团经球形胚、心形胚和胚状体，最后发育成植株。途径二：细胞团增殖为愈伤组织，然后在发芽培养基上诱导出芽，切割芽经过生根后形成完整植株。

上述发芽培养基中含量相对较高的激素是_____ _，胚性细胞的主要特点是______。

A．液泡小、细胞核小 B．液泡大，细胞核大 C．液泡大，细胞核小D．液泡小、细胞核大

（3）为了对烟草的某些性状进行改良，分离的到两种烟草的原生质体后，通过___ __方法将他们的遗传物质组合在一起，经培养获得具有新性状的再生植株。提取再生植株的DNA，采用______扩增相关基因，来鉴定遗传物质是否成功重组。

15.（2016年•全国卷1）空气中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小组欲用平板收集教室空气中的微生物，以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。实验步骤如下：

①配制培养基（成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O）；

②制作无菌平板；

③设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作；

④将各组平板置于37℃恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。

回答下列问题：

（1）该培养基中微生物所需的氮来源于 ，若要完成步骤②，该培养基中的成分X通常是 。

（2）步骤③中，实验组的操作是 。

（3）若在某次调查中，某一实验组平板上菌落平均数为36个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了6个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了 现象。若将30（即36－6）个/平板作为本组菌落数的平均值，该做法 （填“正确”或“不正确”）。

16.（2016•全国卷Ⅲ）某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。回答下列问题：

（1）分离纯化乳酸菌时，首先需要用_________对泡菜滤液进行梯度稀释，进行梯度稀释的理由是________ __。

（2）推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有___________和_________ ___。分离纯化时应挑选出_________________的菌落作为候选菌。

（3）乳酸菌在-20℃长期保存时，菌液中常需要加入一定量的_________（填“蒸馏水”、“甘油”或“碳酸钙”）。

17.（2016年•上海卷）回答下列有关微生物和酶工程的问题。

4

枯草芽孢杆菌盛产蛋白酶，后者在生物医药和日用化工等生产领域具有重要的经济价值，且已大规模产业化应用。

（1）在培养包括枯草芽孢杆菌在内的异养型微生物时，培养基营养成分应包括水和___________（用序号组合回答）。

①淀粉 ②蛋白质 ③生长因子 ④葡萄糖 ⑤无机盐

为筛选枯草芽孢杆菌的蛋白酶高产株，将分别浸过不同菌株（a～e）的分泌物提取液及无菌水（f）

的无菌圆纸片置于含某种高浓度蛋白质的平板培养基表面；在37℃恒温箱中放置2～3天，结果如图1。

（2）大规模产业化首选的菌株是______；菌株b提取物周围没有形成明显清晰区的原因是________ _______。

图2显示枯草芽孢杆菌的蛋白酶和其它酶的热稳定性数据，即酶在不同温度下保温足够长的时间，再在酶活性最高的温度下测其酶活性。在该蛋白酶的工业化生产过程中，通常需对发酵液在60～70℃保温一定时间，再制备酶制剂。

（3）在60～70℃保温一定时间的作用是_____。

A．诱导蛋白酶的热稳定性 B．有利于发挥蛋白酶的最佳活性

C．裂解枯草芽孢杆菌细胞 D．大幅度降低发酵液中其他酶的活性

（4）枯草芽孢杆菌蛋白酶制备的合理工艺步骤应为___ __（选择正确的序号并排序）。

①过滤

②干燥

③破碎

④浓缩

18.（2016年•四川卷）图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，图乙是脲酶基因转录的mRNA部分序列。

5

（1）图中选择培养基应以 为唯一氮源；鉴别培养基还需添加 作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成 色。

5（2）在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为10的土壤样品溶液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。

8该过程采取的接种方法是 ，每克土壤样品中的细菌数量为 ×10个；与血细胞计数板相比，此计数方法测得的细菌数目较 。

（3）现有一菌株的脲酶由于基因突变而失活，突变后基因转录的mRNA在图乙箭头所示的位置增加了70个核苷酸，使图乙序列出现终止密码（终止密码有UAG、UGA和UAA）。突变基因转录的mRNA中，终止密码为 ，突变基因表达的蛋白含 个氨基酸。

19.（2015年•江苏卷）（8分）人工瘤胃模仿了牛羊等反刍动物的胃，可用来发酵处理秸秆，提高秸秆的营养价值。为了增强发酵效果，研究人员从牛胃中筛选纤维素酶高产菌株，并对其降解纤维素能力进行了研究。请回答下列问题： （1）在样品稀稀和涂布平板步骤中，下列选项不需要的是 （填序号）。

①酒精灯 ②培养皿 ③显微镜 ④无菌水

（2）在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是 。

（3）向试管内分装含琼脂的培养基时，若试管口粘附有培养基，需要用酒精棉球擦净的原因是 。

（4）刚果红可以与纤维素形成红色复合物，但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。研究人员在刚果红培养基平板上，筛到了几株有透明降解圈的菌落（见右图）。图中降解圈大小与纤维素酶的 有关。图中降解纤维素能力最强的菌株是 （填图中序号）。

（5）研究人员用筛选到的纤维素酶高产菌株J1和J4，在不同温度和pH条件下进行发酵，测得发酵液中酶活性的结果见下图，推测菌株 更适合用于人工瘤胃发酵，理由是 。

6

20.（2015年•全国卷Ⅰ）已知微生物A可以产生油脂，微生物B可以产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产。回答有关问题：

（1）显微观察时，微生物A菌体中的油脂通常可用________染色。微生物A产生的油脂不易挥发，可选用________（填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”）从菌体中提取。

（2）为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以________为碳源的固体培养基进行培养。

（3）若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用________________直接计数；若要测定其活菌数量，可选用________________法进行计数。

（4）为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在35℃、40℃、45℃温度下降解10g油脂所需酶量依次为4mg、1mg、6mg，则上述三个温度中，____ ℃条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕_____℃设计后续实验。

21.（2015年•山东卷）乳糖酶能够催化乳糖水解为葡萄糖和半乳糖，具有重要应用价值。乳糖酶的制备及固定化步骤如下：

（1）筛选产乳糖酶的微生物L时，宜用 作为培养基中的唯一碳源。培养基中琼脂的作用是 。从功能上讲，这种培养基属于 。

（2）培养微生物L前，宜采用 方法对接种环进行灭菌。

（3）纯化后的乳糖酶可用电泳法检测其分子量大小。在相同条件下，带电荷相同的蛋白质电泳速度越快，说明其分子量越 。

（4）乳糖酶宜采用化学结合法（共价键结合法）进行固定化，可通过检测固定化乳糖酶的 确定其应用价值。除化学结合法外，酶的固定化方法还包括 、 、离子吸附法及交联法等。

22.（2014年•江苏卷）（8分）为了获得β-胡萝卜素产品，某小组开展了产β-胡萝卜素酵母的筛选与色素提取实验。请回答下列问题：

（1）实验用的培养皿常用的两种灭菌方法是 ；为了减少灭菌后器皿被污染，灭菌前应该

。

（2）为了筛选出酵母菌，培养基中添加了青霉素，其目的是

。

（3）下图是灭菌锅及其局部剖面示意图，图中甲、乙、丙指示的依次是

（填序号）。

①安全阀、放气阀、压力表

②放气阀、安全阀、压力表

③安全阀、放气阀、温度表

④放气阀、安全阀、温度表

（4）为了将分离到的菌株纯化，挑取了菌落在3块相同平板上划线，结果其中一块平板的各划线区均未见菌生长，最可能的原因是

。

（5）为增加β-胡萝卜素提取量，在研磨酵母细胞时，添加石英砂的目的是 ；

7

研磨时 （填“需要”或“不需要”）添加CaCO3，理由是 。

23.（2014年•四川卷）有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境。研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分离降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过程如图甲、乙所示。

图甲 图乙

（1）微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、______ __四类，该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆作为唯一碳源，其原因是______ ____。

（2）与微生物培养基相比，植物组织培养的培养基常需添加生长素和___ ____，这些植物激素一般需要事先单独配制成_________保存备用。

（3）纯化菌株时，通常使用的划线工具是______ __。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有___ _____。

（4）为探究苯磺隆的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液做图乙所示实验。该实验的假设是___ _____，该实验设计是否合理？为什么？___ ____。

24.（2014年•全国卷Ⅰ）植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。回答下列问题: （1）分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分组成的复合酶，其中的葡萄糖苷酶可将 分解成 。

（2）在含纤维素的培养基中加入刚果红（CR）时，CR可与纤维素形成 色复合物。用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的 。

（3）为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基（成分见下表）：

培养基甲

培养基乙

酵母膏

+ + 无机盐

+ + 淀粉

纤维素粉

琼脂

+ + + - - + CR溶液

+ + 水

+ + 注：“+”表示有，“－”表示无。

据表判断，培养基甲 （填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是 ；培养基乙 （填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是 。

25.（2014年•全国卷Ⅱ）为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌的分离等工作。回答下列问题：

（1）该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭

8

菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是 ；然后，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为 。

（2）该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过 灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线。这样做的目的是 。

（3）示意图A和B中， 表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。

（4）该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液的 的含量，同时可以使菌体与培养液充分接触，提高 的利用率。

26.（2013年•四川卷）由于酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人将地衣芽孢杆菌的α-淀粉酶基因转入酵母菌中经筛选得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌种（过程如图甲所示）。

（1）图甲中，过程①需要的酶有_________ ____。为达到筛选目的，平板内的固体培养基应以________作为唯一碳源。②、③过程需要重复几次，目的是 ________ ______。

（2）某同学尝试过程③的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示。该同学的接种方法是_________________；推测该同学接种时可能的操作失误是______________。

（3）以淀粉为原料，用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的适宜条件下密闭发酵，接种 ______菌的发酵罐需要先排气，其原因是_____________ ________ __

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__ _。

27.（2013年•全国卷Ⅱ）临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题：

（1）为了从样本中获取致病菌单菌落，可用 法或 法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。

（2）取该单菌落适当稀释，用 法接种于固体培养基表面，在37℃培养箱中培养24h，使其均匀生长，布满平板。

（3）为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀至于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A ；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B ；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明 ；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的 。

（4）根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用抗生素 。

28.（2013年•上海卷）回答下列关于微生物的问题。 阿拉伯胶是一种多糖，研究者从某地合欢树下距离地表深10～15cm处的土样中初筛到 能合成阿拉伯胶降解酶的菌株SM01，以下为该菌株的鉴定过程。

（1）为获得单菌落，可采用__ ___法将初筛菌液接种在____ _培养基上。

（2）SM01的菌落为粉白色，菌落初期呈突起絮状，在显微镜下观察到，菌丝白色致密，且有分生孢子，细胞核直径约1μm，初步推测为真菌，则其特征中，最能说明SM01是真菌的是__ ___。

A．菌落初期呈突起絮状 B．菌落粉白色

C．有菌丝，白色致密 D．有细胞核，且有分生孢子

（3）SM01还一定具有的结构有_____（多选）。

A．细胞膜 B．核糖体 C．拟核 D．荚膜 （4）下表中培养液pH均为6.0，若对SM01中阿拉伯胶降解酶的活力进行测定，则应选用表中的_____培养液，针对不选用的其他培养液，分别说明原因： （1）_______ ______；

（2）_______ _____；

（3）___ _________。 29.（2011•新课标卷）有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同

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学欲从污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。回答问题：

(1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以 为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于 培养基。

（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即 和 （3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力 。

（4）通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、

和

,要求试验操作应在酒精灯

附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。

30.（2011年•山东卷）研究发现柚皮精油和乳酸菌素（小分子蛋白质）均有抑菌作用，两者的提取及应用如图所示。

（1）柚皮易焦糊，宜采用压榨法提取柚皮精油，该过程得到的糊状液体可通过___________除去其中的固体杂质。

（2）筛选乳酸菌A时可选用平板划线法或_______ _____接种。对新配制的培养基灭菌时所用的设备是________ _______。实验前需对超净工作台进行_________处理。

（3）培养基中的尿素可为乳酸菌A生长提供________。电泳法纯化乳酸菌素时，若分离带电荷相同的蛋白质，则其分子量越大，电泳速度_______。

（4）抑菌实验时，在长满致病菌的平板上，会出现以抑菌物质为中心的透明圈。可通过测定透明圈的_________来比较柚皮精油和乳酸菌素的抑菌效果。

31.（2010年•重庆卷）炭疽病是由炭疽杆菌引起的一种人畜共患传染病，炭疽杆菌两端截平、早竹节状排列，菌落呈卷发状，对炭疽病疑似患者，可根据噬菌体的宿主专一性，通过实验确诊。

（1）细菌培养：采集疑似患者的样本，分离培养，获得可疑菌落。

（2）细菌鉴定：实验流程如题图所示。

①对配制的液体培养基等需采取 方法灭菌；实验所用液体培养基的碳源为

。

②挑选可疑菌落制片后，用 观察，可看到呈竹节状排列的杆菌。

③接种可疑菌后，35℃培养24小时，液体培养基变浑浊，原因是 ，

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对照组试管中应加入 ，与实验组同时培养6小时后，若实验组液体培养基的浑浊度比对照组 （填“高”或“低”），则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染；反之则排除。

④对排除的疑似患者及易感人群，可接种炭疽杆菌疫苗，刺激机体产生相应抗体。与产生抗体相关的细胞除T细胞、B细胞外，还有 。

32.（2010年•全国卷Ⅰ）下列是与微生物培养有关的问题，请回答：江苏省震泽中

（1）某细菌固体培养基的组成成分是KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4、葡萄糖、尿素、琼脂和蒸馏水，其中凝固剂是 ，碳源是 ，氮源是 。已知只有能合成脲酶的细菌才能在该培养基上生长，故该培养基属于 培养基。按照化学成分分类，该培养基属于 培养基。从同化作用类型上看，用该培养基培养的细菌属于 。

（2）将少量细菌接种到一定体积的液体培养基中，适宜条件下培养，定时取样测定菌体数目，以时间为横坐标，以细菌数目的对数为纵坐标，可得到细菌的 曲线。该曲线中以菌体数目的对数作为纵坐标的原因是 。实验室中，为了获得形态和生理特征一致的菌体，一般应在 期取材；在生产中，常收集培养至 期的细菌用于次级代谢产物的提取。

33.（2010年•山东卷）生物柴油是一种可再生清洁能源，其应用在一定程度上能够缓人类对化石燃料的消耗。科学家发现，在微生物M产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油（如下图）。

微生物M 提取

油料作物

植物油

脂肪酶

江苏省震泽中学张

华民整理

生物柴油

甲醇

（1）筛选产脂肪酶的微生物M时，选择培养基中添加的植物油为微生物生长提供 ，培养基灭菌采用的最适方法是 法。

（2）测定培养液中微生物数量，可选用 法直接计数；从微生物M分离提取的脂肪酶通常需要检测 ，以确定其应用价值；为降低生产成本，可利用 技术使脂肪酶能够重复使用。

（3）若需克隆脂肪酶基因，可应用耐热DNA聚合酶催化的 技术。

34.（2009年•上海卷）氯苯化合物是重要的有机化工原料，原因不易降解，会污染环境。某研究小组依照下列实验方案（图1）筛选出能高效降解氯苯的微生物SP1菌，培养基配方如表1.

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（1）配制Ⅱ号固体培养基时，除添加Ⅱ号液体培养基成分外，还应添加1%的__________。

（2）培养基配制时，灭菌与调pH的先后顺序是____________。

（3）从用途上来说，Ⅰ号培养基和Ⅱ号培养基分别属于_______培养基和______ 培养基。在Ⅱ号培养基中，为SP1菌提供氮源的成分是_________。

（4）在营养缺乏或环境恶劣时，SP1的菌体会变成一个圆形的休眠体，这种休眠体被称为

____________。

（5）将SP1菌接种在含不同浓度氯苯的Ⅲ号培养液中培养，得到生长曲线（如图2）。从图2可知SP1菌在________培养条件下最早停止生长，其原因是________ _。

35.（2009年•全国卷Ⅰ）（1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑 、

和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、 、

等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。

（2）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行 （消毒、灭菌）；操作者的双手需要进行清洗和 ；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能 。

（3）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的 。

（4）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的 。

（5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是 。

（6）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过 处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。

36.（2008•山东卷）科学家发现家蝇体内存在一种抗菌活性蛋白。这种蛋白质具有极强的抗菌能力，收到研究者重视。

（1）可用金黄色葡萄球菌来检验该蛋白质的体外抗菌特性。抗菌实验所用培养基中的牛乳膏和蛋白胨主要为细菌生长提供 和 。

（2）分别在加入和未加入该抗菌蛋白的培养基中接种等量菌液。培养一定时间后，比较两种培养基中菌落的 ，确定该蛋白质的抗菌效果。

（3）抗菌培养常用的接种方法有 和 。实验结束后，对使用过的培养基应进行 处理。http://www.gaozhanhe.cn 37.（2008年•天津卷）莠去津是一种含氮的有机化合物。它是广泛使用的除草剂之一。

+(1)莠去津的作用机理之一是阻断光反应中的电子传递过程，影响NADP形成 ，进而影响在 中进行光合作用的暗反应过程，最终抑制杂草生长。

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(2)从使用莠去津的农田中，选到了能遗传的耐莠去津杂草，将它与敏感型植株杂交，结果见下表：

杂交亲本

耐药型♀×敏感型♂

敏感型♀×耐药型♂

后代中耐药型植株比例(％) 后代中敏感型植抹比例(％) 100 0 0 100 由表推断，控制该耐药性状的基因位于 （细胞核/细胞质）中。

(3)莠去津在土壤中不易降解，为修复被其污染的土壤，按下面程序选育能降解莠去津的细菌(目的菌)。已知莠去津在水中溶解度低，含过量莠去津的固体培养基不透明。

据图回答：

（1）由于莠去津的 作用，在长期使用莠去津的土壤中可能含有目的菌。

（2）下图是A～C瓶中三类细菌的最大密度柱形图。由图推断，从A瓶到C瓶液体培养的目的是 ；甲类细菌密度迅速降低的主要原因 ；

从A瓶中应选择细菌生长处于 期的菌液加入到B瓶中，培养效果会更好。

（3）在固体培养基中，无透明带菌落利用的氮源主要是 ；有透明带菌落利用的氮源主要是 ，据此可筛选出目的菌。

38.（2008年•广东卷）苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在若降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，所以人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所示，①为土壤样品，请回答下列问题：

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（1）②中培养目的菌株的选择培养基中应加 作为碳源，②中不同浓度碳源的培养基 （A.影响；B.不影响）细菌的数量，如果要测定②中活细菌数量，常采用 法。

（2）④为对照、微生物在④中不生长、在⑤中生长，④与⑤培养基的主要区别在于 ；使用 法可以在⑥上获得单菌落。采用固体平板培养细菌时为什么进行倒置培养？ 。

（3）如何比较不同菌株降解苯酚能力的大小？ （4）实验过程中如何防止其它微生物的污染？ 39.（2007年•山东卷）乙醇等“绿色能源”的开发备受世界关注。利用玉米秸杆生产燃料酒精的大致流程为：

发酵

玉米秸杆

预处理、水解

糖液

酒精

（1）玉米秸杆经预处理后，应该选用 酶进行水解，使之转化为发酵所需的葡萄糖。

（2）从以下哪些微生物中可以提取上述酶？ （多选）

A．酿制果醋的醋酸菌 B.生长在腐木上的霉菌

C．制作酸奶的乳酸菌 D.生产味精的谷氨酸棒状杆菌

（3）若从土壤中分离产生这种酶的微生物，所需要的培养基为 （按功能分），培养基中的碳源为 。

（4）从生物体提取出的酶首先要检测 ，以便更好地将酶用于生产实践。在生产糖液的过程中，为了使酶能够被反复利用，可采用 技术。

（5）发酵阶段需要的菌种是 ，在产生酒精时要控制的必要条件是 。

40.（2007年•新课标卷）某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此实验相关的问题。

（1）培养基中含有蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了 和 。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是 和 。

（2）对培养基进行灭菌，应该采用的方法是 。

（3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于 中培养，培养的温度设定在37℃。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种

作为对照进行实验。

（4）培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有 种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越 。

（5）如果提高培养基中NaCl的浓度，可以用于筛选耐 细菌，这种培养基被称

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为 。

41.（2005年•北京卷）某化工厂的污水池中，含有一种有害的、难于降解的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能高效降解化合物A的细菌（目的菌）。实验的主要步骤如图所示。请分析回答问题：

（1）培养基中加入化合物A的目的是筛选 ，这种培养基属于 培养基。

（2）“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的 ，实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是 。

（3）培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量 的培养液，接入新的培养液中连续培养，使“目的菌”的数量 。

（4）转为固体培养时，常采用 的方法接种，获得单菌落后继续筛选。

（5）若研究“目的菌”的生长规律，将单个菌落进行液体培养，可采用 的方法进行计数，以时间为横坐标，以 为纵坐标，绘制生长曲线。

（6）实验结束后，使用过的培养基应该进行 处理后，才能倒掉。

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