课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数ppt配套教案板书设计

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

一、筛选菌株的思路及统计菌落数目的方法

（一）筛选菌株的思路

1、自然界中的目的菌株的筛选：

（1）依据：根据它对的要求，到相应的环境中去寻找。

（2）实例：PCR技术过程中用到的耐高温的，就是从热泉中筛选出来的tap细菌中提取出来的。

2、实验室中的目的菌株的筛选

（1）原理：人为提供有利于生长条件（包括营养、温度、PH等），同时的生长。

（2）方法：利用选择培养基分离

①选择培养基：

②实例：

加减成份加青霉素等

抗生素加高浓度食

盐水

不加氮源

（无氮培养

基）

不加碳源

（无碳培养

基）

以尿素为唯

一氮源

以纤维素为

唯一碳源

分离菌种

（二）统计菌落数目

1、常用方法：

（1）原理：

①当样品的足表面够高时，培养基表面生长出，来源于稀释培养液中的

。

②通过统计平板上的来推测样品中大约有的活菌数。

（2）计算公式：=（C÷V）×M

C：代表某一稀释度下平板上生长的

M：代表涂布平板时所用的（ml），M代表

①为了保证结果的准确，每个稀释度，一般设置，选择菌落在30—300的平板进行计数，

②统计的菌落数往往要比活菌的实际数目，原因是当两个或多个细胞连在一起，平板上观察到的只是，因此，统计结果一般用，而不用

③设置对照：主要目的是排除实验组中对实验结果的干扰，提高实验结果的可信度。

2、其他方法：直接计数

3、两种常用的计数方法比较

间接计数[来源学科网]主要用具

显微镜、培养基计数依据菌株本身

培养基上

优点计数方便、操作简单计数都是活菌

缺点死菌活菌都计算在内操作复杂，有一定误差

计算公式

二、实验设计及操作提示

（一）实验设计

1、土壤取样：（1）土壤要求：富含，PH接近中性且潮湿（2）取样要求：距离地面的

土壤层。

2、制备培养基：准备，制备9个平板培养基。

3、样品稀释：（1）稀释原因：样品稀释程度直接影响平板上生长的菌落数目。（2）稀释标准：选用

一定稀释范围的样品液进行培养，保证获得的菌落数在，便于计数。（3）稀释倍数：

测定土壤中的的数量，一般选

用；测定的数量，一般选用

；测定真菌的数量，一般选用。

4、涂布平板：（1）在上述培养基中的9个平板地面，每三个一组分别记号104、105和106倍三种稀释液。

（2）用三支1ml无菌吸管分别从104、105和106倍的三管土壤稀释液中吸取0.1ml 对号放入已写好稀释度的平板，用无菌涂布器在培养基表面上轻轻涂布均匀。

5、培养观察：（1）培养：不同种类微生物，需要不同的培养和培养。

（2）观察：每隔24小时统计一次菌落数目，最后选取时的记录为结果。

6、计数：当菌落数目稳定时，取同一稀释度下的3个平板计数，求出并根据对应的稀释

度计算出样品中细菌的数目。

（二）操作提示

1、无菌操作

（1）去土壤的用具在使用前需要

（2）应在，并在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶，塞好

（3）在稀释土壤样液的过程中，每一步都在操作

2、做好标记：

本实验使用的平板和试管比较多，为避免混淆，最好使用前就做好

（1）培养皿的标记：注明培养基的种类、培养日期以及平板上培养样品的等

（2）试管标记：将已经进行过稀释操作的试管，按的顺序，依次放在试管架的

另一行。

3、制定计划：对于耗时较长的生物实验，事先要，以便提高工作效率。

（三）菌种鉴定

1、原理：分解尿素的细菌合成的将尿素分解为，使培养基的增强。

2、方法：在以的培养基中加入指示剂培养细菌，若指示剂变，初步

鉴定该种细菌能够分解尿素。