课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教学教案设计

课题2

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

(时间：30分钟

满分：50分)

考查知识点及角度

基础

选择培养基的制备

微生物的分离

微生物的计数

一、选择题(每小题4分，共20分) 1．在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时又能抑制或者阻止其他种类微生物生长的培养基称做

(

)。

A．鉴别培养基

C．选择培养基

B．加富培养基

D．基础培养基

1 3、4 2、5 难度及题号

中档

6 7 稍难

8

解析

选择培养基可选择目标微生物，同时抑制或杀死其他微生物。

答案

C 2．平板划线法和稀释涂布平板法是纯化微生物的两种常用方法，下列描述正确的是

(

)。

A．都要将菌液进行一系列的梯度稀释

B．平板划线法是将不同稀释度的菌液通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作

C．稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基进行培养

D．都会在培养基表面形成单个的菌落

解析

平板划线法不需要进行梯度稀释，稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液滴加到固体培养基的表面。平板划线法和稀释涂布平板法都能在培养基表面形成单个菌落。

答案

D 3．本课题以土壤中的细菌为研究对象，要达到的目的是

(

)。

①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌

②从土壤中分离出能够分解氨的细菌

③统计每克土壤样品中究竟含有多少分解尿素的细菌

④统计所取土壤样品中究竟含有多少分解尿素的细菌

A．①③

B．②④

C．①②

D．③④

解析

从土壤中分离分解尿素的细菌并对其计数，统计的是每克土壤样品中含多少分解尿素的细菌，用公式“每克样品中菌落数＝(C/V)×M”进行推测，其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积/mL，M代表稀释倍数。

答案

A 4．下列关于土壤取样的叙述，错误的是

(

)。

A．土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤

B．先铲去表层土3～8 cm左右，再取样

C．取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌

D．应在火焰旁称取土壤

解析

土壤取样过程中，为防止杂菌污染，取样用的小铁铲和信封在使用前必须灭菌。

答案

C 5．用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是

(

)。

A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230 B．涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238 C．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163 D．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233 解析

在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性，所以A、B不正确。C项虽涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另两个相差太远，说明在操作过程中可能出现了

错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。

答案

D 二、非选择题(共30分) 6．(10分)如表所示为分离分解尿素的细菌所用的培养基配方：

KH2PO4

Na2HPO4

MgSO4·7H2O 葡萄糖

尿素

琼脂

自来水

请根据以上配方，回答下列问题。

(1)该培养基含有微生物所需要的________类营养物质。其中最主要的碳源是葡萄糖，氮源是尿素。

(2)该培养基按物理性质划分是________培养基；按培养基的作用划分是选择培养基，该培养基具有选择作用的原因是__________________________ ______________________________________________。

(3)在该培养基中，可通过检测pH的变化来判断尿素是否被分解，依据的原理是___________________________________________________________ ______________________________________________________________。

(4)若用该培养基来鉴定某种细菌是否能够分解尿素，可在培养基中加入________指示剂，尿素被分解后指示剂变________色。

(5)某同学尝试使用罐头瓶在常温下制作果酒，开始时向消过毒的罐头瓶中加入了新鲜的葡萄汁和酵母菌，添加酵母菌的原因是_________________ _______________________________________________________，

添加葡萄汁的目的是为酵母菌的生长发育提供_____________________。

答案

(1)4 (2)固体

该培养基中唯一的氮源是尿素，只有能分解尿素的微生物才能在该培养基上生长和繁殖

(3)在细菌分解尿素的过程中，细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养1.4 g 2.1 g 0.2 g 10.0 g 1.0 g 15.0 g 定容至1 000 mL

基的pH升高

(4)酚红

红

(5)酵母菌能分解葡萄糖形成酒精(或酵母菌进行无氧呼吸产生酒精)

所需的各种营养物质(或碳源、氮源、水、无机盐和生长因子) 7．(10分)急性肠胃炎、手足口病分别是由细菌、病毒通过消化道进入人体导致的。因此检验饮用水的细菌含量和病毒含量是有效监控疾病发生的必要措施，请回答下列与检验饮用水有关的问题。

(1)检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，记录菌落数量，这种方法称为__________________。如图所示的四种菌落分布图中，不可能是用该方法得到的是______。

(2)用该方法统计样本菌落数时是否需要设置对照组？______。为什么？______________________________________________________________。

(3)如分别取0.1 mL已稀释103倍的水样分别涂布到三个琼脂固体培养基的表面进行培养，培养基记录到大肠杆菌的菌落数分别为55、56、57，则每升原水样中大肠杆菌数为______。

(4)已知大肠杆菌能发酵乳糖并产酸产气，现提供足量的已灭菌的乳糖蛋白胨培养液和具塞试管，应如何判断待检水样中是否含有大肠杆菌？____________________________________________________________。

解析

纯化大肠杆菌的方法——稀释涂布平板法和平板划线法。删除偏差太大的数据，对剩下的多个培养数据进行平均处理就可以得到水样中的大肠杆菌数。大肠杆菌能发酵乳糖并产酸产气，通过密封培养，大肠杆菌可以进行无氧呼吸产生气体，以气泡的形式释放出来。

答案

(1)稀释涂布平板法

D

(2)需要

因为需要判断培养基是否被杂菌污染(培养基灭菌是否合格)

(3)5.6×108

(4)通过无菌操作向试管内注入一定量待检水样，再注入已灭菌的乳糖蛋白胨

培养液将试管充满，塞上塞子，混匀后置于37 ℃恒温箱培养24 h。若试管内有气泡生成，则说明水样中有大肠杆菌

8．(10分)富集培养是微生物学中最强有力的技术手段之一，主要是指利用不同微生物间生命活动的特点不同，仅适应该条件的微生物生长旺盛，从而使其在群落中的数量大大增加，人们能够更容易地从自然界中分离到所需的特定微生物。富集条件可根据所需分离的微生物的特点，从物理、化学、生物等综合多个方面进行选择，如温度、pH、紫外线、高压、光照、氧气、营养等许多方面。如图描述了采用富集方法从土壤中分离能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物的实验过程。请分析回答下面的问题。

(1)本实验所需要的培养基为______________，碳源为______________。

(2)实验原理是___________________________________________________

(3)①→③重复培养的目的是______________________________________。

(4)⑤的菌落中大部分是降解________________的微生物。

(5)⑥为________组，⑦为________组，设置⑥的目的是_____________________________________________________________ ___________________________________________________________。

(6)⑤→⑥采用____________法，接种到⑥的培养基中，在操作过程中为防止污染应注意的事项是___________________________ _______________________________________________________________。

解析

本题考查了微生物培养的相关知识。先用含有对羟基苯甲酸为唯一碳源的液体培养基，经过富集培养之后，将其涂布到平板培养基中，然后将单菌落接种到液体培养基中，才能得到纯度较高的微生物。

答案

(1)选择培养基

对羟基苯甲酸

(2)利用以对羟基苯甲酸为唯一碳源的选择培养基，经富集培养，选择出能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物

(3)增大分解对羟基苯甲酸微生物的比例

(4)对羟基苯甲酸

(5)对照

实验

说明通过富集培养的确得到了欲分离的目标微生物

(6)单菌落挑取

接种环在火焰上灼烧灭菌，烧红的接种环在空气中冷却，同时，打开皿盖挑取菌落接种到试管中，并塞好棉塞，接种环在火焰上灼烧，杀灭残留物