课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优质课教案

土壤中分解尿素的微生物的分离教学设计

一、教材分析

教材从尿素在农业上的重要用途切入，介绍了土壤中能分解尿素的细菌，进而说明这种细菌的作用是能够合成分解尿素的酶。教学中，教师可以联系生产生活实际，使学生对尿素以及分解尿素的细菌形成一定的感性认识。教材还简要地介绍了尿素的发现过程以及尿素合成的历史，这些都是“科学、技术、社会”教育的丰富素材。最后，教材明确指出了本课题的目的，有助于学生准确把握课题的方向。

二、教学目标

1.知识与技能

利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数。

2.过程与方法

体验无菌操作的实验过程。

3.情感、态度与价值观

关注我们身边周围都存在细菌，养成讲究卫生的良好习惯。

三、教学重点

对土样的选取和选择培养基的配制。

四、教学难点

对分解尿素的细菌的计数。

五、教学过程

一、

导入课题教师讲解：复习上节内容，创设情景，引入新课

二、

尿素背景知识介绍

三、筛选菌株

1.介绍;PCR技术是一种常用的DNA扩增技术，此项技术的自动化，需要使用耐高温的DNA聚合酶，如果请你来找这种耐高温的酶，你会去哪里找？

热泉70-80摄氏度的高温条件淘汰了绝大多数微生物，而耐热的Taq细菌脱颖而出。

启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。

2、实验室中微生物的筛选原理实验室筛选：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。

3、选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。目的是从众多微生物中分离所需要的微生物。

4、培养基选择分解尿素的微生物的原理：培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶

的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。

2、统计菌落数目

1、直接计数法：最常用的显微镜直接计数

2、间接计数法：最常用方法稀释涂布平板法。

每克样品中的菌株数=(C÷V)×M

C：某一稀释度下平板上生长的平均菌落数

V：涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)

M：稀释倍数 1、学生举例血球计数板属于直接计数法。

2、学生讨论并区别：稀释涂布平板法是用来计数的，而平板划线法是用来纯化的。知识的迁移，培养学生的知识整合能力。

3、设置对照

1、对照实验是指除了被测试的条件外，其他条件都相同的实验。满足该条件的称为对照组，未满足该条件的称为实验组。设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。

2、实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时，A同学筛选出约150个菌落，但其他同学只选择出约50个菌落，分析其原因。教师要求学生设计实验方案。

学生设计实验方案：

方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验;

方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。

小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。培养学生的怀疑精神，并根据自身设计实验方案进行验证。培养学生的实验设计能力。

实验设计

1、教师讲解样品的稀释和稀释液的取样培养流程示意图。

二、土壤取样：

1.取样地点：从肥沃、湿润的土壤中取样。

方法：先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。

2.制备培养基和样品的稀释：

制备以尿素为唯一氮源的选择培养基，并按一定倍数稀释。

3、微生物的培养与观察：

每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果。

4。计算样品中的菌落数方法：

统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的平均值，然后按课本旁栏的公式进行计算。（土壤中各类微生物的数量(单位：株/kg)是不同的，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。）

三．注意事项

1、无菌操作

a、取土用小铁铲、盛土样信封在使用前都需要灭菌。

b、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。

c、在稀释土壤溶液的过程中，每步都要在火焰旁操作。

2、做好标记

注明培养基种类、培养日期、平板培养样品的稀释度等。

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