课题3　分解纤维素的微生物的分离课堂实录【3】

课题3 分解纤维素的微生物的分离

教学设计

课题目标

简述纤维素酶的种类及作用，从土壤中分离出分解纤维素的微生物；掌握从土壤中分离某种特定微生物的操作技术

教学过程

一、基础知识

（一）纤维素与纤维素酶：阅读“纤维素与纤维素酶”，回答下列问题：

1．纤维素的化学组成： 三种元素，是一种由 首尾相连而成的多糖。纤维素能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生 酶。

【思考1】草食性动物是怎样消化食物中纤维素的？

2．纤维素的分布： 是自然界中纤维素含量最高的天然产物，此外，木材、作物秸秆等也富含纤维素。

3．纤维素酶的作用：纤维素酶是一种 ，一般认为它至少包括三种组分，即 酶、 酶 酶，前两种酶使纤维素分解成 ，第三种酶将纤维二糖分解成 。

〖思考2〗实验分析：P27的小实验是如何构成对照的？

〖思考3〗1个酶活力单位是指在温度为 ℃，其它反应条件最适宜情况下，在 min内转化 的底物所需要的酶量。

（二）纤维素分解菌的筛选活动：阅读“纤维素分解菌的筛选”，回答下列问题：

1．筛选方法： 染色法。

2．筛选原理：刚果红可以与像纤维素这样的多糖物质形成 ，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以 为中心的透明圈，我们可以通过 来筛选纤维素分解菌。

二、实验设计

实验方案流程图

土壤取样

纯化培养

微生物培养

1．土壤取样：采集土样时，应选择富含 的环境。

〖思考4〗为什么要纤维素分解菌？

2．选择培养：称取土样20 g，在无菌条件下加入装有30mL培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固

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定在 上，在一定温度下振荡培养1～2 d，直至培养液变 。也可重复选择培养。

〖思考6〗培养基选择作用机制是什么？

〖思考7〗若设置一个对照实验说明选择培养的作用，应控制的变量是什么？

173、梯度稀释：

依次将培养液稀释10～10倍。思考是如何操作的？

4、将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上

<1>制备培养基：参照课本旁栏中的比例。 <2>倒平板操作。 <3>涂布平板：将稀释度为104～106的菌悬液各取0．1 mL涂布在平板培养基上，30℃倒置培养。

5、刚果红染色： ①刚果红染色法：常用的刚果红染色法有两种即 。

②填表比较两种染色法的各自的优缺点

是 、 。

染色法

优点

缺点

方法一

方法二

〖思考4〗本实验流程与尿素分解菌的分离实验流程有哪些异同？

〖思考5〗为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物？

三：结果分析与评价

1为了确定分离得到的是纤维素分解菌，还需要进行 实验，纤维素酶的发酵方法有 发酵和 发酵。

2纤维素酶测定方法是对纤维素酶分解滤纸等纤维素所产生的 含量进行定量测定。

【课时训练】

一、选择题

1、在加入刚果红的培养基中出现透明圈的菌落是…………………… ( ) A．分解尿素的细菌 B．硝化细菌 C．分解纤维素的细菌 D．乳酸菌

2、本实验关于选择培养目的叙述正确的是… ( ) A．可以增加纤维素分解菌的浓度 B．可以减少纤维素分解菌的浓度

C．所用培养基是固体培养基 D．所用培养基是平板培养基

3．刚果红能与哪项物质形成红色复合物 ( ) A．纤维二糖 B．纤维素 C．葡萄糖 D．麦芽糖

4．纤维素分解菌的选择培养基有选择作用，原因在于其含有… ( ) A．NaNO3 B．KCl C．酵母膏 D．纤维素粉

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5．选择培养时应将锥形瓶固定在 ( ) A．桌子上 B．温箱里 C．窗台上 D．摇床

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