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专题2课题二土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、教学目标1.举例说明什么是选择培养基,并研究培养基对微生物的选择作用。2.设置重复组和对照组,对土壤中分解尿素的细菌进行分离和计数。二、教学重难点【重点】选择培养基的作用【难点】菌落数目的统计三、教学过程㈠研究思路1.自然界中目的菌株的筛选(1)依据:

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课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课时教案

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课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课时教案

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正文

专题2课题二

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

一、教学目标

1.举例说明什么是选择培养基,并研究培养基对微生物的选择作用。

2.设置重复组和对照组,对土壤中分解尿素的细菌进行分离和计数。

二、教学重难点

【重点】选择培养基的作用

【难点】菌落数目的统计

三、教学过程

㈠研究思路

1.自然界中目的菌株的筛选

(1)依据:根据它对生存环境的要求,到相应的环境中去寻找。

(2)实例:PCR技术过程中用到的耐高温的TaqDNA聚合酶,就是从热泉中筛选出来的Tap细菌中分离到的

2.实验室中目的菌株的筛选

(1)理论依据

人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养.温度pH等),同时抑制或阻止其他微生物生长,

(2)选择培养基

指在微生物学中,允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基

3.统计菌落数目

(1)常用方法:活菌计数法

①统计依据

a.当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌

b.通过统计平板上的菌落数来推测样品中大约含有的活菌数,

②注意事项:为保证结果准确,一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。

(2)其他办法:利用显微镜直接计数。

4.设置对照

目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响,提高实验结果的可信度

㈡实验设计

1.土壤取样

(1)土壤要求:富含⑩有机质,pH接近11中性且潮湿。

(2)取样部位:据地表约3~8cm的土壤层。

2.制备培养基

3.样品处理

样品的稀释程度直接影响平板上生长的菌落选用一定稀释范围的样品液进行培养,保证聚落数在30~300之间,便于计数。

4.微生物的培养与观察

将培养基平板放于30~37℃温室培养1~2天,每隔24h统计一次14菌落数目,最后选取数目稳定时的记录作为结果

5.细菌的计数

当菌落数目稳定时,取同一稀释度下的至少3个平板进行计数,求出平均值,并根据所对应的公式计算出样品中细菌的数目

㈢结果分析与评价

1.培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落

对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长,说明培养基没有杂菌污染,牛肉膏培养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目,说明培养基已筛选出一些菌落。

2.样品的稀释操作是否成功

如果得到了2个获2个以上菌落数目在30~300的平板,则说明稀释操作比较成功,并能够进行菌落的计数。

3.重复组的结果是否一致

如果学生选取的是同一种土样,统计的结果应该接近

㈣操作提示

1.无菌操作

(1)取土样的用具在使用前都需要灭菌。

(2)应在火焰旁称取土壤,并在火焰附近将土样倒入烧瓶中,塞好面塞。

(3)在稀释土壤溶液的过程中,每一步都要在火焰旁操作。

2.做好标记

本实验使用的平板和试管比较多,为避免混淆,最好在使用前就做好标记

3.规划时间

对于耗时较长的生物实验,要事先规划时间,以便提高工作效率,在操作时更加有条不紊。

㈤课题延伸

细菌合成的脲酶将尿素分解成氨,使培养基的碱性增强。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌,若指示剂变红,可确定该种细菌能够分解尿素。

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