资料摘要
课题3 血红蛋白的提取和分离一、课题的目标:通过尝试对血液中血红蛋白的提取和分离,理解色谱法、电泳法二、课题重点:凝胶色谱法的原理和方法三、课题难点:样品的预处理、色谱柱填料的处理和色谱柱的装填思考:“课题1--DNA的粗提取与鉴定”实验理想的材料是什么?“课题3--血红蛋白的提取和分离”这实验理想
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课题3 血红蛋白的提取和分离教学设计
未知
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关键词:课题3 血红蛋白�…教学设计
正文
课题3
血红蛋白的提取和分离
一、课题的目标:通过尝试对血液中血红蛋白的
提取和分离,理解色谱法、电泳法
二、课题重点:凝胶色谱法的原理和方法
三、课题难点:样品的预处理、色谱柱填料的处理
和色谱柱的装填
思考:
“课题1--DNA的粗提取与鉴定”
实验理想的材料是什么?
“课题3--血红蛋白的提取和分离”这实验理想的材料又是什么?原因是?
答:鸡的红细胞具有细胞核,含有DNA,便于进行DNA的提取,哺乳类动物成熟的红细胞无细胞核,结构简单,血红蛋白含量丰富便于提取血红蛋白。
一、基础知识:
(一)蛋白质分离原理
(二)蛋白质分离的方法
1)凝胶色谱法:又称分配色谱法
2)电泳法
(三)缓冲液的作用
蛋白质提取与分离的依据--
蛋白质的物理化学性质差异:
1.分子的形状、大小
2.电荷性质和多少
3.溶解度
4.吸附性质
5.对其他分子亲和力
2.凝胶电泳法:
电泳:带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程
1)原理:
不同蛋白质的带电性质(正电荷或负电荷)、电量、分子形状和大小不同,在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同,导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。
2)影响蛋白质分子运动速度的因素
3)常用电泳方法
琼脂糖凝胶电泳
聚丙酰胺凝胶电泳
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
在测定蛋白质分子量时通常用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,使用时可选用一组已知分子量的标准蛋白同时进行电泳做对照,根据两者的电泳区带位置,利用相关计算公式算出相对分子量
SDS 带负电荷多的
,因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷的差别,使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小。
1.洗
涤
红
细
胞
阅读思考:洗涤的目的是什么?
洗涤的方法是什么?
洗涤干净的标志是什么?
2.释放血红蛋白
阅读思考:
释放血红蛋白过程中,在洗涤好的红细胞加入了
哪些物质,有什么用?
目的分析:
蒸馏水的作用是______________________________。
加入甲苯的作用是____________________________。
充分搅拌的目的是____________________________。
注意:
(1)凝胶颗粒+蒸馏水→充分溶胀;凝胶装填时尽量紧密;装填时不能有气泡存在:因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序,降低分离效果。
(2)装完后,立即用缓冲液洗涤,使凝胶装填紧密
练习巩固
1、用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中,关于蛋白质的叙述,正确的是
A、
相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对
分子质量较大的蛋白质
B、
相对分子质量较小的蛋白质行程小于相对
分子质量较大的蛋白质
C、
相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对
分子质量较大的蛋白质
D、
二者根本无法比较
9.样品的加入和洗脱的操作不正确的是
A、加样前,打开色谱柱下端的流出口,使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面
B、加样后,打开下端出口,使样品渗入凝胶床内
C、等样品完全进入凝胶层后,关闭下端出口
D、用吸管小心的将1ml透析后的样品加到色谱柱的顶端,不要破坏凝胶面
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