课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数PPT及专用教学设计内容

课题

考点、

知识点

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

课时

2 授课班级

2019级

筛选的原理、分离、计数

1.分离微生物的原理

学习目标

2.利用选择培养基分离细菌

3.统计细菌数目的方法

重、难点

.教学重难点：利用选择培养基分离细菌

统计细菌数目的方法

教学过程

教学内容

学生活动

复习微生1.微生物的营养: 物培养的基础知识

2.培养基的制备: （回忆)

3.无菌操作技术:

4.接种方法:

学生阅读一．基础知识

尿素是一种重要的氮肥，农作物不能（能，不能）直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为

氨和CO2 ，这是因为细菌能合成

脲酶

。

课题背景交流表述尿素的特点及作用

二.筛选菌株

提问:生物与环境之间的关系?

生物适应一定环境，环境对生物具有选择作用。

阅读筛选举例子：水生耐热细菌Taq ( Thermus aquaticus ) 菌株,思——耐高温的Taq DNA聚合酶

考问题,

美国微生物学科布鲁克1966年发现耐热细菌

回答.

特殊的培养基能筛选出特殊的微生物吗?

1、实验室微生物的筛选原理（P21）：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。

2、选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。

阅读后思考回答问加入青霉素的培养基

——细菌不生长，酵母菌、霉菌等真菌能生长

题

不加含碳有机物的无碳培养基

——分离自养型微生物

三．统计菌落数目

1、显微镜直接计数法

2.常用来统计样品中活菌数目的方法是

稀释涂布平板法

。

分析思考和回答.

1、几个菌落粘连一起，只要肉眼能区分，就算几个；

2、不管菌落大小，只要肉眼看得见，就应该计数；

3、菌落数目过多时，可以合理采用样方法。

阅读

分析思考思考1：如何根据平板上的菌落数推测出每mL样品中的菌株数？

和回答.

统计某一稀释度下平板上的菌落数，计算出平板上的菌落数的平均值，然后按公式每mL样品中的菌株数=（C÷V）×M进行计算。

平板菌落数统计注意事项：

思考2：统计的菌落数往往比活菌的实际数目高还是低，为什么？

小组讨论低。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。

并回答

思考3：为了增强实验结果的说服力和准确性，我们在实验设计时应该怎么做更合理？

实验基本原则：1、平行重复原则

2、对照原则

3、单一变量原则

四.实验设计:

1.有哪些重要环节? 阅读

分析思考取样

稀释

涂平板

培养与观察

计数

鉴定

和回答

2.

各环节需要哪些工具?

3.

操作时注意的问题?

土壤微生物主要分布在距地表3～8cm的近中性土壤中，约70％～80％为细菌。

分离不同的微生物采用不同的稀释度，其原因是不同微生物在土壤中含量不同，其目的是保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板。细菌稀释度为104、105、106，放线菌稀释度为103、104、105，真菌稀释度为102、103、104。

培养不同微生物往往需要不同培养温度。细菌一般在30～37℃培养1～2d，放线菌一般在25～28℃培养5～7d，霉菌一般在25～28℃的温度下培养3～4d。

取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。

1）应在火焰旁称取土壤

10 g。将称好的土样倒入盛有90mL无菌水的

锥形瓶中，塞好棉塞。

2）在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行。

3）实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。

4)为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当事先规划时间。

五、结果分析与评价

1、结合对照，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落。

2、是否获得了某一稀释度下，菌落数目在30——300的平板。在这稀释度下，是否至少有两个平板的菌落数相近？

3、你统计的每克土壤中含有能分解尿素的细菌的菌落数是多少？与其他同学的结果接近吗？如果差异很大，可能是什么原因引起的？

六、课题延伸

在以

尿素

为唯一氮源的培养基中加入

酚红

指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变

红

，说明该细菌能够

分解尿素

。

微生物计数——滤膜法：以测定饮用水中大肠杆菌的数目为例。将已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养液基上培养。在该培养基上，大肠杆菌的菌落呈现黑色。可以根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量. 总结：

人为

有利于目的菌株生长

土壤分离筛选微生物的原理

条件

抑制或阻止其他微生物生

中尿

素分稀释涂布平板法

微生物计数方法与原理

解菌显微镜直接计数

的分对照设置与重复设置

离与

计数

实验方案

实验操作

结果与分析

实验设计

课堂练习

1.某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml）(

)

A. 2.34×108

B. 2.34×109

C. 234

D. 23.4

2.用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目，其结果与实际值相比

（

）

A.比实际值高

B.比实际值低

C.和实际值一致

D.比实际值可能高也可能低

3.下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是

(

) A. KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、

葡萄糖、尿素、琼脂、水

B. KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、

葡萄糖、琼脂、水

C. KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、

尿素、琼脂、水

D. KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、

牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水

引导学生归纳记忆

课堂练习