课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教学实录及点评

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

一、教学目标：

1.利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数

2.分析研究思路的形成过程，找出共性和差异性

3.形成无菌不在的概念，养成讲究卫生的习惯

二、教学重点：对土样的选取和选择培养基的配制

三、教学难点：对分解尿素的细菌的计数

四、教学过程

（一）展示评价导学案

（二）导引探究：

〖思考1〗在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是

葡萄糖

，提供氮源的的是

尿素

，琼脂的作用是

凝固剂

。

〖思考2〗该培养基对微生物

具有

（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是

只有能够以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长

。

〖思考3〗在统计菌落数目时，常用来统计样品中活菌数目的方法是

稀释涂布平板法

。除此之外，

显微镜直接计数

也是测定微生物数量的常用方法。

〖思考4〗采用稀释涂布平板法统计菌落数目时，培养基表面生长的一个菌落，来源于

样品稀释液中一个活菌

。通过统计

平板上的菌落数

，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在

30～300 的平板进行计数。

〖思考5〗从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是

（平均菌落数÷涂布的稀释液体积）×稀释倍数

。

〖思考6〗利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是恰当的稀释度

。

〖思考7〗第

二

位同学的结果接近真实值。你认为这两位同学的实验需要改进的操作是第一位同学需设置重复实验组；第二位同学统计的三个菌落数相差太大，说明操作有误，需重新实验。

分析：

（1）统计的菌落数比活菌的实际数目

低

。这是因为当两个或多个细胞在一起时，平板上观察到的只是

一个

菌落。因此，统计结果一般用

菌落数

来表示。

（2）设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。

（三）实验设计

根据图示2－7填写以下实验流程：

配制土壤溶液

菌落计数

系列稀释

涂布平板与培养

注：

1、土壤微生物主要分布在距地表3～8cm的近中性土壤中，约70％～80％为细菌。

2、

分离不同的微生物采用不同的稀释度，其原因是不同微生物在土壤中含量不同（细菌稀释度为104、105、106，放线菌稀释度为103、104、105，真菌稀释度为102、103、104）。

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3、

培养不同微生物往往需要不同培养温度。（细菌一般在30～37℃培养1～2d，放线菌一般在25～28℃培养5～7d，霉菌一般在25～28℃的温度下培养3～4d）

4、

在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。

5、菌落的特征包括

形状、大小、隆起程度、颜色

等方面。

（四）

实验过程

1）取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。

2）应在火焰旁称取土壤

10 g。将称好的土样倒入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，塞好棉塞。

3）在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行。

4）实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。

注：在研究未知微生物时务必规范操作，以防被致病微生物感染，实验后一定要洗手。

（五）结果分析与评价

1、在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的

脲酶

将尿素分解成了氨

。氨会使培养基的碱性增强

，PH升高。因此，我们可以通过检测培养基

pH 变化来判断该化学反应是否发生。

2、在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素

。

扩展：测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到

伊红美蓝

培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现

黑

色，通过记述得出水样中大肠杆菌的数量。在该实验中至少应取

三

个水样。

（六）课堂总结、点评

土壤人为

有利于目的菌株生长

分离筛选微生物的原理

中尿条件

抑制或阻止其他微生物生长

素分

稀释涂布平板法

解菌微生物计数方法与原理

显微镜直接计数

的分

对照设置与重复设置

离与

计数

实验方案

实验操作

结果与分析

实验设计

（五）反馈提升：

某生物小组以空气中细菌含量为指标，调查校园内不同区域（教室、草场、校长室、卫生间）的空气质量状况。请你写出完整的实验调查方案。

（六）教学反思：

本节课可以从尿素在农业上的重要应用切入，介绍能分解尿素的细菌，进而说明这种细菌的作用是能够合成分解尿素的酶。在教学过程中，可以联系生产生活实际，使学生对尿素以及分解尿素的细菌形成一定的感性认识。对于实验中的对照原则，可以指导学生分组讨论，在掌握微生物分离技术的同时巩固实验设计的基本原则。

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