复习与测试名师教学设计

微生物培养技术在食品生产的应用

—毛豆腐生产中毛霉的选育

西交大苏州附中 陈蓉芳

情境导入：讨论筛选发酵性状优良的毛霉菌种实验方案：

挑取菌丝

制备菌悬液

分离纯化

保藏菌种

流程一、挑选优质菌丝

流程二、制备菌悬液

1、

关于培养基

毛霉的最爱—孟加拉红培养基成分

蛋白胨

5g 磷酸二氢钾

1g 氯霉素

0.1g 琼脂

20 g 葡萄糖

10g 硫酸镁(MgSO4·7H2O)

0.5g 1/3000孟加拉红溶液

100mL 蒸馏水

1000mL 培养基

按物理性质

营养成分

制备流程

分类

按用途

氮源

碳源

重要提醒：

a.常见选择培养基

待筛选微生物

尿素分解菌

固氮菌

纤维素分解菌

自养微生物

酵母、霉菌等真菌

b.倒平板

培养基的营养构成

水

无机盐

⑴排排序:正确的倒平板顺序为：

A

B C D 1

⑵改错：某同学将灭菌后的培养基，用温度计测量50度就进行倒平板；先将锥形瓶通过火焰，然后左手打开皿盖放到一边以免培养基溅到污染；盖好皿盖后立即倒置。

⑶思考一：冷却后的平板为何要倒置？

思考二：如何判断新制的平板是否污染？

2、

关于无菌技术

连连看

处理对象 方法

接种环 干热灭菌

实验室 灼烧灭菌

培养皿 紫外线

培养基 70%酒精

实验员手、衣物 高压蒸汽灭菌

【典例一】

（2014江苏节选）

（1）右图是灭菌锅及其局部剖面示意图，图中甲、乙、丙指示的依次是

。（填序号）①安全阀、放气阀、压力表 ②放气阀、安全阀、压力表

③安全阀、放气阀、温度表 ④放气阀、安全阀、温度表

（2）实验用的培养皿常用的两种灭菌方法是 和 为了减少灭菌后器皿被污染，灭菌前应该 。

（3）到灭菌时间后，当 指针降到零方可打开 ，再打开盖子，取出灭菌物品。

流程三、分离纯化菌种

1.平板划线法

a.动动手：

模拟平板划线法

b．找找茬

c．辨一辨

（1）在第一次平板划线之前要灼烧接种环

。( ) （2）为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落。（ ）

（3）每次划线都要从上一次划线的末端开始。( ) （4）转换划线角度后需灼烧接种环再沾取菌液后进行划线。 ( ) （5）若进行四区域划线，只有第四区会出现单菌落。( ) （6）若进行四区域划线，一共需要灼烧接种环5次。( ) 【典例二】某同学在进行毛霉分离纯化实验时划线某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有

。

2.稀释涂布平板法

（1）浓度梯度稀释具体操作：从10倍-100倍？

（2）滴加到培养基表面的菌液一般不超过0.1毫升，为什么？

（3）涂布时可转动培养皿，对吗？

【

典例三】某同学在进行毛霉分离纯化实验时，采用了稀释涂布平板法，发现在稀释2

度为10-1000时并没有出现菌落，出现菌落情况如下，回答以下问题

稀释度

10000 100000 1000000 平板

1 2 3 1 2 3 1 2 3 菌落数

412 389 407 94 102 98 19 22 26 原始菌悬液样

品中活菌数

（1）各梯度分别涂布3个平板的目的？

（2）应选择哪个稀释度计数？说明理由

（3）计算原始菌悬液每毫升有多少个活菌数？（每个平板滴加0.1毫升菌液）

（4）稀释涂布平板法统计的菌落数比活菌实际值数据偏大还是偏小？说明理由

（5）平板划线法也可用于计数吗？

流程四、保藏菌种、扩大培养

扩大培养，应该选用

（形态）培养基

短期保藏毛霉可采用

接种，4℃保藏

长期保藏毛霉可采用甘油-20℃保藏

课题延伸：微生物培养技术在其他方面的应用

木质素结构复杂难分离，大部分木质素在工业应用中都随废液排掉，既造成资源的极大浪费又引起严重的环境污染。如造纸业，染料业等。白腐真菌漆酶等次级代谢产物能彻底降解木质素生成CO2，因此白腐菌在制浆造纸、发酵肌酐生产优质饲料、中药材的预处理等方面具有重要作用。实验人员为了从环境中分离获得白腐菌，进行了如下实验：

（1）培养过程中，需将锥形瓶放在摇床上振荡，一方面使菌株与培养液充分接触，提高营养物质的利用率；另一方面能____ _ ___________。

（2）为进一步鉴定菌种，需从菌株中提取少量的DNA分子通过 (填技术)扩增并检测（3）若用培养基培养白腐菌，除考虑营养条件外，还要考虑 、 和渗透压等条件。

(4)图甲、图乙为两种常见的平板划线法：连续划线法和四区划线法，前者适用于纯化菌种较少的样品，后者适用于纯化菌种较多的样品。

图乙中依次进行四区划线，四区的面积要求为C

甲

乙

3

（2016届苏州零模）利用微生物转化胆固醇在医药生产上有重要作用。实验人员从土壤中筛选胆固醇转化菌株的过程如下图。请分析回答下列问题：

（1）实验人员将土壤样品接种到富集培养液①中培养时，需要将其置于摇床上不断震荡，其主要的作用有

、

。

（2）培养一段时间后，从①中取适量培养液转移接种到选择培养液②中培养36h后，再转移到相同的选择培养液③中培养。与培养液①不同，培养液②③成份的主要特点是

。在相同的培养液②③中转移培养主要是为了避免原培养液中的

干扰，同时，又可以

。

（3）从③中取适量的培养液涂布到④之前，需要

，涂布前需将涂布器

。

（4）根据⑤中菌落的形态特征，选取所需的菌种接种到

培养基⑥中临时保藏。

（5）为进一步鉴定菌种，需从菌株中提取少量的DNA分子通过

（技术）扩增并检测。

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