课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课堂实录及点评

课题一、

复习目标

2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

1、分离纯化微生物的研究思路、方法

2、从土壤中分离出分解尿素的细菌的原理

3、如何统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌

二、复习重点

对土壤的选取和选择培养基的配制

三、

复习难点

对分解尿素的细菌计数

四、

复习方法

运用多媒体课件讲练结合

五、

教学过程

（高频考点展示）

（基础知识回顾）

（高考真题体验）

1．(2016·四川高考)图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，图乙是脲酶基因转录的mRNA部分序列。

(1)图中选择培养基应以________为唯一氮源；鉴别培养基还需添加________作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成________色。

(2)在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品溶液0.1 mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。

该过程采取的接种方法是__________________，每克土壤样品中的细菌数量为________×108个；与血细胞计数板计数法相比，此计数方法测得的细菌数较________。

(3)现有一菌株的脲酶由于基因突变而失活，突变后基因转录的mRNA在图乙箭头所示位置增加了70个核苷酸，使图乙序列中出现终止密码(终止密码有UAG、UGA和UAA)。突变基因转录的mRNA中，终止密码为________，突变基因表达的蛋白含________个氨基酸。

解析：(1)脲酶能够催化尿素分解释放出氨和二氧化碳，因此选择培养基中应以尿素为

唯一氮源。挑取单菌落接种到加有酚红指示剂的鉴别培养基中，培养一段时间后，菌落周围的氨增加，pH升高，酚红指示剂将变红。(2)该过程采取的接种方法为稀释涂布平板法。利用稀释涂布平板计数法对细菌进行计数时，应选择菌落数在30～300的平板，因此平板上长出的细菌菌落平均数为(156＋178＋191)÷3＝175个。每克土壤样品中的细菌数为175÷0.1×105＝1.75×108个。血细胞计数板计数法能将死细胞计算在内，而稀释涂布平板计数法只能计数活细胞(只有活细胞才能在平板上生长)，故一般血细胞计数板计数法要比稀释涂布平板计数法的结果大。(3)箭头处插入70个核苷酸，箭头后密码子的解读方式为*AG，UGA，GAA……对比3种终止密码可发现，此处的终止密码为UGA。从起始密码到终止密码之前共有273＋72个碱基，因此突变基因表达的蛋白质含115个氨基酸。

答案：(1)尿素

酚红

红

(2)稀释涂布平板法

1.75

少

(3)UGA

115 拓展·归纳|统计菌落数目的两种方法

(1)显微镜直接计数法：

原理

方法

缺点

(2)间接计数法(活菌计数法)：

原理

计算公式

操作

当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌

每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M，其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数

设置重复组，增强实验的说服力与准确性。同时为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数

利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量

用计数板计数

不能区分死菌与活菌

（巩固练习）

2、某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml）

(

) A. 2.34×108 B. 2.34×109 C. 234 D. 23.4 （当堂检测）

3．下列关于“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验的叙述，错误的是(

) A．土壤取样时应选取距地表约3～8 cm的土壤层

B．测定细菌的数量，一般选用104、105和106倍的稀释液

C．土壤中能合成脲酶的细菌能分解尿素

D．向以尿素为唯一氮源的培养基中加入刚果红溶液可以鉴定出分解尿素的细菌

解析：选D

测定细菌数量，一般选用104、105和106倍稀释液进行平板培养；测定真菌的数量，一般选用102、103和104倍稀释液；测定放线菌的数量，一般选用103、104和105倍稀释液。鉴定分解尿素的细菌时需向以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。

课题延伸

1、在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。

2、测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到

伊红-美蓝

培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记算得出水样中大肠杆菌的数量。