资料摘要
《多聚酶链式反应扩增DNA片段》教学设计教学目标(一)知识与技能1.了解PCR技术的基本操作2.理解PCR的原理3.讨论PCR的应用(二)过程与方法在多聚酶链式反应扩增DNA片段的实验过程中,应避免外源DNA污染,严格控制温度等反应条件(三)情感、态度与价值观 通过对PCR实验的操作及结果分析
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课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段ppt配套的教学设计及说课稿
未知
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关键词:课题2 多聚酶链�…ppt配套的教学设计及说课稿
正文
《多聚酶链式反应扩增DNA片段》教学设计
教学目标
(一)知识与技能
1.了解PCR技术的基本操作
2.理解PCR的原理
3.讨论PCR的应用
(二)过程与方法
在多聚酶链式反应扩增DNA片段的实验过程中,应避免外源DNA污染,严格控制温度等反应条件
(三)情感、态度与价值观
通过对PCR实验的操作及结果分析,培养学生严谨的科学态度和实事求是的科研精神
教学重难点
重点:PCR的原理和PCR的基本操作
难点:PCR的原理
教学过程
(一)引入新课
科技不断发展,在人文经济社会,很多考古生物检定,案件调查、基因诊断、人类基因组计划等都离不开DNA技术,在现代生物技术中,DNA技术可谓是尖端技术。都离不开对DNA分子碱基序列的分析。而分析DNA碱基序列,就需要一定量的DNA片段。那么怎样迅速获得足够量的DNA片段呢?今天我们来研究学习DNA分子的扩增技术――PCR技术。
(二)进行新课
1.1 细胞内DNA复制条件分析:
条件
组分
作用
模板
DNA的两条单链
提供复制的模板
原料
四种脱氧核苷酸
合成DNA子链的原料
酶
解旋酶
打开DNA双螺旋
DNA聚合酶 催化合成DNA子链
能量 ATP 为解螺旋和合成子链供能
引物
RNA 为DNA聚合酶提供合成的3’端起点
1.2 PCR技术: (1)概念:教材58页 一种体外迅速扩增DNA片段的技术
(2)原理:利用热变形原理进行体外DNA复制
(3)前提:一段已知目的基因的核苷酸序列
(4)原料:模板DNA DNA引物(DNA 或RNA ,5’-3’) 四种脱氧核苷酸 热稳定DNA聚合酶(Taq 酶)
(5)条件:高温(自动调控温度的仪器) 缓冲溶液(注:类似核基质,为DNA复制提供场所)
(6)过程:(三部曲) A.变性(90--95℃) (30s)解旋酶、ATP,DNA两条链打开,,形成两条DNA单链。
注意:温度过高,影响酶活性,时间太长,使酶钝化;温度过低,解旋不完全,不能达到
扩增目的
B.退火(55-60℃) 55℃
引物结合:引物通过碱基互补配对与两条单链DNA单链3’端与DNA反向配对结合,确保引物3’端与DNA单链准确配对。
C.延伸(70-75℃)72℃
DNA聚合酶结合:
子链合成:DNA聚合酶从引物3’端开始,将配对的脱氧核苷酸连接起来。
后续加工:DNA聚合酶I将引物切去,并合成空缺处的DNA单链,再由DNA连接酶将不连续的DNA子链连接起来(半不连续合成。先导链,滞后链)
子链合成特点:不能从头合成;合成方向为“5’→3’合成”。
(三)课后作业
复习基础知识并比较PCR技术扩增DNA的过程与细胞内DNA复制过程,从以下几个方面去分析:
不同点:产物、温度、解旋方式、引物、复制特点
相同点:聚合方向、模板、原料、原则、复制特点
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