附录4　常用的消毒灭菌操作方法ppt配套的教学设计及说课稿

常用的消毒灭菌操作方法教学设计

教学目标：

知识目标：

1、掌握消毒、灭菌及无菌操作的概念。

2、熟悉常用的消毒灭菌的方法及适用范围。

技能目标：实验操作中初步掌握无菌技术要领，能说出常用灭菌法种类，并能根据相关消毒灭菌需要来选择合适灭菌法。

德育目标：树立严谨求实的科学精神,培养认真细致的工作态度。

教学重点：消毒灭菌相关概念的内涵及差异,消毒灭菌法的种类及适用范围. 教学难点：消毒灭菌设备的操作方法。

教学方法：启发式提问，多媒体课件、演示法、视频等

教学过程：

引入：在实验室培养微生物，一方面需要为培养的微生物提供合适的营养和环境条件，另一方面需要确保无杂菌的混入。因此，防止杂菌入侵，获得纯净的微生物，是研究和应用微生物的前提。

一

无菌技术

在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法称为无菌技术。

学生活动1：阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题：

1．获得纯净培养物的关键是什么？（防止外来杂菌的入侵）

2．无菌技术包括：

（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行 ；（清洁和消毒）

（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行 ；（灭菌）

（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在 附近旁进行；

（酒精灯火焰）

（4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相 。（接触）

思考1：无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是什么？

还有防止感染实验操作者。

归纳：无菌技术的目的：防止外来杂菌的入侵；有效避免操作者自身被微生物感染。

二

消毒与灭菌

1

消毒的定义：利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。（不包括芽孢和孢子）

2

灭菌的定义：是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括所有细菌的孢子、芽孢、霉菌及病毒，从而达到完全无菌的过程。

思考2：什么是芽孢？与孢子有什么区别？

师介绍：

芽孢:有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体。

芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.

孢子:在生物体的一定部位产生一种特殊的生殖细胞。孢子的特点是能直接长成新个体。

3、比较消毒和灭菌（填表）

比较项

消毒

灭菌

理化因素的作用强度

消灭微生物的数量

芽孢和孢子能否被消灭

三、常用的消毒与灭菌的方法

（一）消毒的操作方法：

1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min，可杀死微生物细胞和一部分芽孢。日常生活常用。

2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下15min(牛奶）。

什么是巴氏消毒？

牛奶巴氏消毒法是法国人巴斯德于1865年发明，经后人改进，用于彻底杀灭啤酒、酒、牛奶、血清白蛋白等液体中病原体的方法，也是现世界通用的一种牛奶消毒法。

巴氏消毒的目的是杀死牛奶中可能存在的所有有害微生物（包括一切致病菌）。在巴氏消毒法发明前，欧洲因喝生牛奶或吃乳制品而染结核病的人不计其数。由于当时还未发明抗菌素，因此，因结核病而死的人也是不计其数。但自从巴氏消毒法广泛应用以后，因喝牛奶而染此病的人已很少见。但现在世界上也有一些地方的人喜欢喝生牛奶，比如我国的内蒙。据科学家调查，在内蒙牧民肺结核病人中，有10.6%的患者有喝生牛奶的习惯。

巴氏消毒法还用于消毒啤酒、白酒等东西，经过巴氏消毒的啤酒叫干啤；不经巴氏消毒，只能冻藏保鲜的啤酒就是生啤。

巴氏消毒的原理是什么？ 在一定温度范围内，温度越低，细菌繁殖越慢；温度越高，繁殖越快。但温度太高，细菌就会死亡。不同的细菌有不同的最适生长温度和耐热、耐冷能力。巴氏消毒其实就是利用病原体不是很耐热的特点，用适当的温度和保温时间处理，将其全部杀灭。但经巴氏消毒后，仍保存小部分无害或有益、较耐热的细菌或细菌芽孢，因此巴氏消毒牛奶要在4℃左右的温度下保存，且只能保存3-10天，最多16天。

3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源

4、紫外线消毒法：接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果，然后使用紫外线进行物理消毒。

（二）灭菌方法：

1.干热灭菌法

是在干燥环境下用高温杀死细菌和细菌芽孢的技术。用于不能耐受湿热蒸气、不能用高压蒸气灭菌的物品，如必须保持干燥的化学物品，有刃器械如刀、剪之类，无水的油剂、油膏、甘油等。一般有火焰灭菌法（灼烧灭均）和干热空气灭菌法。

（1）火焰灭菌法（灼烧灭菌）是指用火焰直接烧灼的灭菌方法。该方法灭菌迅速、可靠、简便，适合于耐火焰材料(如金属、玻璃及瓷器等)物品与用具的灭菌，不适合药品的灭菌。

思考3：对接种环灭菌时要用酒精灯的哪一层火焰灼烧可能伸入试管或培养皿的部位？

充分燃烧层

（2）、干热空气灭菌：

是指用高温干热空气灭菌的方法。该法适用于耐高温的玻璃和金属制品以及不允许湿热气体穿透的油脂(如油性软膏机制、注射用油等)和耐高温的粉末化学药品的灭菌，不适合橡胶、塑料及大部分药品的灭菌。

操作过程：见书85页

思考4：利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是什么？

避免妨碍热空气流通

2、高压蒸气灭菌：

灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在100kPa的压力下，锅内温度达121℃温度下维持15-30min，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。

操作步骤

（1）首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。

（2）放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。

（3）加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。

（4）加热灭菌锅，打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。

（5）到灭菌时间后，切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。如果压力未降到0时，打开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染。

（6）将取出的灭菌培养基放入

37℃温箱培养24小时，经检查若无杂菌生长，即可待用。

思考5：灭菌到时间后，切断热源，使温度自然降温，气压务必降至零时才打开锅盖，其目的是什么？（防止容器中的液体暴沸出容器，造成污染）

注意事项：

（1）待灭菌的物品放置不宜过紧。

（2）必须将冷空气充分排除，否则锅内温度达不到规定温度，影响灭菌效果。

（3）灭菌完毕后，不可放气减压，须待灭菌器内压力降至0才可开盖，否则瓶内液体会剧烈沸腾，冲掉瓶塞而外溢造成污染。

（4）装培养基的试管或瓶子的棉塞上，应包油纸或牛皮纸，以防冷凝水入内。

请学生观看视频：高压蒸气锅的使用方法。

4、紫外线灭菌法：

指用紫外线（能量）照射杀灭微生物的方法，紫外线不仅能使核酸蛋白变性，而且能使空气中氧气产生微量臭氧，从而达到共同杀菌作用。

课堂总结：

板书设计：

定义

无菌技术

关键

目的

定义

消毒

方法：

定义

灭菌

方法：

课堂练习：1、连线无菌技术的类型、方法及对象

2.采用干热灭菌、灼烧灭菌、高压蒸汽灭菌、紫外线照射等几种方法，可分别杀灭哪些部位的杂菌( B )

A．接种环、吸管、培养基、接种室

B．吸管、接种环、培养基、接种箱

C．培养基、接种环、吸管、接种箱

D．培养皿、吸管、培养基、双手

3．细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌(C)

A．接种环、手、培养基

B．高压锅、手、接种环

C．培养基、手、接种环

D．接种环、手、高压锅