课题3　血红蛋白的提取和分离第二课时教学设计

高考二轮复习

专题2

选修1 第4讲

蛋白质的提取和分离

班别：____________

姓名：____________

【学习目标】

考纲

蛋白质的提取和分离

考点

1、蛋白质分离的依据；

2、蛋白质分离的方法；

3、血红蛋白的提取和分离；

重点：凝胶色谱法的原理和方法。

难点：样品的预处理、色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。

目标达成

自评说明：

A 完全掌握；

B 明白但不会运用；

C 不明白

【自主学习】

1、蛋白质分离的依据：根据蛋白质各种特性的差异分离不同种类的蛋白质。如分子的____________；所带电荷的____________；溶解度；吸附性质；对其他分子亲和力等。

2、蛋白质分离的方法：

（1）_______________，又称分配色谱法。

①含义：根据_______________的大小分离蛋白质的方法。

②原理：

凝胶内部

路程

移动速度

洗脱顺序

相对分子质量小

进入，被滞留

相对分子质量大

被排阻在外，迅速通过

（2）__________ ①含义：___________在_______的作用下发生迁移的过程。

②原理：利用待分离样品中各种分子___________的差异以及分子本身的______、_______的不同，产生不同的___________，从而实现各种分子的分离。

在一定的pH下，一些生物大分子（如多肽、核酸等）可解离的基团会带上正电或负电，在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷______的电极移动。

③常用电泳方法：______________________和______________________。测定蛋白质分子量时通常使用______________________。

寄语：鲜花与荆棘同路，汗水伴欢笑齐飞！

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3、血红蛋白的提取和分离

方法：离心除去血浆

红细胞样

_____ 目的：_____________ 品

处

方法：_____________ 释放

理

_______目的：溶血，释放_________

方法：离心

分离血

红蛋白

目的：分离血红蛋白溶液

粗

方法：__________ 分

离

目的：去除_______________________

纯化

纯度

鉴定

方法：_____________ 原理：相对分子质量不同的分子在凝胶柱中的________不同

结果：相对分子质量_____的分子先洗脱出来

_____________________________ 【合作探究】：

1、哺乳动物成熟的红细胞适用于进行蛋白质的分离原因有哪些？

2、将收集的血红蛋白溶液放在透析袋中进行透析的目的是什么？其依据的原理是？

3、进行体外实验时，如何保证蛋白质不会发生变性呢？如何证明凝胶色谱法获得的蛋白质是目的蛋白？

寄语：鲜花与荆棘同路，汗水伴欢笑齐飞！

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【自主纠错】：

1、下图是某生物兴趣小组在“蛋白质的提取和分离”实验中，准备从猪的血液中初步提取血红蛋白，设计的“血红蛋白提取、分离流程图”。请回答下列有关问题：

实验准备：配制缓冲液血细胞悬液→样品处理：洗涤、破碎、离心等→蛋白质粗分离：透析→纯化、纯度鉴定：凝胶色谱法、电泳等

（1）样品处理中红细胞的洗涤要用__________反复冲洗、离心。向红细胞悬液中加入一定量的低浓度pH 7.0的缓冲液并充分搅拌，可以破碎红细胞，破碎细胞的原理是_________________________________________________________。

（2）血红蛋白粗分离阶段，透析的目的是______________________________，若要尽快达到理想的透析效果，可以_________________________(写出一种方法)。

（3）血红蛋白的纯化是通过__________法将相对分子质量大的杂质蛋白除去。

（4）电泳利用了待分离样品中各种分子的______________________等的差异而产生不同迁移速度，实现各种分子的分离。

（5）一同学通过血红蛋白醋酸纤维薄膜电泳，观察到正常人和镰刀型细胞贫血症患者的血红蛋白电泳结果如图所示。由图可知携带者有_____种血红蛋白，从分子遗传学的角度作出的解释是________ _________________________________________ __________________________________________。

2、回答有关蛋白质分离和纯化的问题

（1）要获得血清蛋白的粗制品，必须将含有柠檬酸钠的血液进行_______处理，然后将___________装入透析袋中除去__________。

（2）要获得血红蛋白，应如何破碎红细胞？

________________________________________。

（3）图为血清蛋白通过醋酸纤维薄膜的电泳图谱，你认为含量最多的蛋白质是__________，含负电荷最多的球蛋白是__________，相对分子质量最大的球蛋白是__________。

（4）电泳是目前应用最为普遍的__________蛋白质的方法。

3、图表示血红蛋白提取和分离的部分实验装置，请回答下列问题：

（1）甲装置中，B是血红蛋白溶液，则A是_________；乙装置中，C溶液的作用是____________________________________。

（2）甲装置用于_________，目的是_________________________。用乙装置分离

寄语：鲜花与荆棘同路，汗水伴欢笑齐飞！

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蛋白质的方法叫______________________，

是根据__________________分离蛋白质的有效方法。

（3）在操作中加样(右图)的正确顺序是_______________。在执行图中②所示操作时，色谱柱下端连接的尼龙管应该_____ (打开或关闭)。

（4）图二、图三分别是甲、乙同学利用

同一种样品分离得到的结果，则图三中与图

二中蛋白质P对应的是____________。

4、已知某样品中存在甲、乙、丙、丁、戊五种蛋白质分子，其分子大小、电荷的性质和数量情况如下图所示。

（1）将样品装入透析袋中透析12h，若分子乙保留在袋内，则分子____也保留在袋内

（2）若用凝胶色谱柱分离样品中的蛋白质，则分子____移动速度最快

（3）若将样品以2000r/min的速度离心10min，分子戊存在于沉淀中，则分子____可能不存在于沉淀中

【高考演练】：

1、以下关于猪血红蛋白提纯的描述，不正确的是（ ）

A. 洗涤红细胞时，使用生理盐水可防止红细胞破裂

B. 猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少

C. 血红蛋白的颜色可用于凝胶色谱法分离过程的监测

D. 在凝胶色谱法分离过程中，血红蛋白比分子量较小的杂蛋白移动慢

【课堂小结】：

寄语：鲜花与荆棘同路，汗水伴欢笑齐飞！

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