课题3　血红蛋白的提取和分离含PPT的教学设计及点评

课题3

血红蛋白的提取和分离（1）

学习要求：1.尝试对血液中血红蛋白的提取和分离2.了解色谱法，电泳法等分离生物大分子的基本原理，学习重点难点：1.重点：凝胶色谱法和电泳的原理和方法

；缓冲溶液

2.难点：凝胶色谱法和电泳的原理

课堂组织形式：课堂小组讨论展示、评价，练习

学法指导：提前自学预习，课上当堂检测。标有A层只要求A层学生完成。

【预

习

案】

㈠ 凝胶色谱法（分配色谱法）：

1、概念：根据被分离蛋白质的（ ），利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来分离蛋白质的有效方法。

2、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（ ）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（

），移动速度（

），而（

）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（ ），移动速度（ ），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。

3、具体过程：A. 的蛋白质由于 作用进入凝胶颗粒内部而被滞留； 的蛋白质被排阻在凝胶颗粒外面，在了里之间迅速通过。

B.（1） 混合物上柱；

（2）洗脱开始， 的蛋白质扩散进入凝胶颗粒内； 的蛋白质被排阻于凝胶颗粒之外；

（3） 的蛋白质被滞留； 的蛋白质被向下移动。

（4） 不同的蛋白质分子完全分开；

5） 的蛋白质行程较短，已从 中洗脱出来， 的蛋白质还在行进中。

㈡ 缓冲溶液：

1、概念：在一定的范围内，能对抗外来 或稍加稀释不引起溶液 发生明显变化的作用叫做 作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。

2、作用：能够抵制 的对溶液的 的影响，维持PH基本不变。

3、缓冲溶液的配制：通常由 种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的 使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察（红色）和材料的科学研究（活性）

㈢电泳：1、概念：指 在电场作用下发生迁移的过程。

2、原理：许多重要的生物大分子，如 等都具有 在 下，这些基团会带上 。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子 以及分子本身 、 的不同使带电分子产生不同的 ，从而实现样品中各种分子的分离。

3、分类： 电泳； 电泳。

4.测定（

蛋白质相对分子质量

）：通常用十二烷基硫酸钠（SDS）—

电泳

蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带 的多少以及 等因素。

5.为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶中加入 。SDS能使蛋白质发生完全 ，SDS所带负电荷的量大大 了蛋白质分子原有电荷量。使电泳迁移率完全取决于 。

探究案

【合作探究一】

人们用鸡的红细胞提取DNA，而用人成熟的红细胞提取血红蛋白的原因是什么?

【合作探究二】凝胶色谱法分离蛋白质的原理

思考1：说出人体血液中缓冲对？

思考2：在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？

讨论：凝胶色谱法分离蛋白质的原理

例题．用凝胶色谱法分离蛋白质时，相对分子质量大的蛋白质(

)。

A．路程较长，移动速度较慢

B．路程较长，移动速度较快

C．路程较短，移动速度较慢

D．路程较短，移动速度较快

【合作探究三】缓冲溶液

阅读教材65页讨论缓冲溶液及意义

【合作探究四】电泳的作用及其原理

1.

学生阅读

教材65-66页，讨论问题3：电泳的概念和电泳技术。

2.

讨论问题4 SDS的作用

3.

问题5聚丙稀酰胺凝胶电泳分离蛋白的原理

[来源:Z&xx&k.Com][来源:Zxxk.Com]检测案

1、凝胶色谱分离法分离蛋白质时，凝胶的种类较多，但其作用的共同点是

(

) A、改变蛋白质分子通过凝胶时的路径B、吸附一部分蛋白质，从而影响蛋白质分子的移动速度

C、将酶或纽胞固定在凝胶中D、与蛋白质分子进行化学反应，从而影响其移动速度

2、下列各项中，一般不影响凝胶色谱法分离蛋白质中的分离度的是

(

) A、层析柱高

B、层析柱的直径

C、缓冲溶液

D、样品的分布

3、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中决定蛋白质或多肽移动速度的主要因素是

(

) A、蛋白质分子所带的电荷

B、蛋白质分子的形状

C、蛋白质分子的相对分子质量

D、缓冲溶液的pH 4、下面说法不正确的是

(

) A、在一定范围内，缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变

B、缓冲溶液通常由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成

C、电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程

D、透析袋能使大分子自由进出，而将小分子保留在袋内

5凝胶色谱法分离蛋白质中使用的凝胶是交联葡聚糖凝胶，其中G、75的含义为

(

) A、G表示凝胶的使用量，75表示加25 g水

B、G表示凝胶的交联程度，75表示需加热到75℃

C、G表示凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范围，75表示每克凝胶膨胀时吸水7、5g

D、G表示凝胶的膨胀体积,75表示每克凝胶膨胀时体积可达75cm3 6.下列各项中不属于电泳使样品中各分子分离的原因的是(

)。

[来源学科网ZXXK]A．分子带电性质的差异

A层

B．分子的大小C．分子的形状

D．分子的变性温

7.下列关于电泳的说法不正确的是(

)。

A．电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程

B．带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动

C．蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少

D．用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳，蛋白质的电泳迁移率完全取决于分子的大小

[来源:学科网ZXXK][来源学。科。网Z。X。X。K]课后反思：