课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优质课教案

课题2：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数（学案）

【学习目标】研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定

【重、难点】对土样的选取和选择培养基的配制。对分解尿素的细菌的计数。

【自主学习】阅读课本P21－26，完成下列空格

一、理论基础

1．筛选菌株

(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于

生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时

或

其他微生物生长。

(2)选择培养基：在微生物学中，将允许

种类的微生物生长，同时

或

其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。

（3）配制选择培养基的依据

根据选择培养的

以达到选择的目的。例如，培养基中不加入有机物可以选择培养

微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培养

的微生物，加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。

2．统计菌落数目

（1）测定微生物数量的常用方法有

和

。

（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理

当样品的

足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个

。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少

。为了保证结果准确，一般选择菌落数在

的平板进行计数。

3．设置对照

设置对照的主要目的是排除实验组中

对实验结果的影响，提高实验结果的

。例如：为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以培养

的培养基作为空白对照。

二、实验设计

关于土壤中某细菌的分离与计数实验操作步骤如下：

1．

取样：从肥沃、湿润的土壤中取样。应先

3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的

中。

2．制备

：准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基

将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显

选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为

，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。

3．样品的

和微生物的

与观察

将10g土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为250 mL)，充分摇匀，吸取上清液

ml，转移至盛有

ml的生理盐水的无菌大试管中，将土样以1、101、102……

依次等比稀释至107稀释度，并按照由107～103稀释度的顺序分别吸取

ml进行平板涂布操作。每个稀释度下需要3个选择培养基、1个牛肉膏蛋白胨培养基。

将涂布好的培养皿放在30℃温度下培养，及时观察和记录。

挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含

培养基的斜面中，观察能否产生如教材中图2-lO的颜色反应。

4．细菌的计数

当菌落数目稳定时，选取菌落数在

的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出

，并根据平板所对应的稀释度计算出样品

中细菌的数目。

三、思考与讨论

1、如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？

2、为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？

四、结果分析与评价

1、对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助

的方法。

2、在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的

将尿素分解成了

。氨会使培养基的碱性

，PH

。因此，我们可以通过检测培养基

变化来判断该化学反应是否发生。

3、在以

为唯一氮源的培养基中加入

指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变

，说明该细菌能够

。

五、典例分析

【例1】分析下面培养基的配方：KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H20、葡萄糖、尿素、琼脂。请回答：

(1)在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别

和

。

(2)想一想这种培养基对微生物是否具有选择作用? 如果具有，又是如何进行选择的? 【例2】用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中得到以下几种统计结果，正确的是

(

)

A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230

B．涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238

C．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163

D．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是2l0、240和250，取平均值233

【例3】用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是

(

) A．未接种的选择培养基

B．未接种的牛肉膏蛋白胨(全营养)培养基

C．接种了的牛肉膏蛋白胨(全营养)培养基

D．接种了的选择培养基