课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数第一课时导学案

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1.

选择性培养基是根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基，其功能是使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选效率。我国劳动人民在12世纪（宋代）时，已根据红曲霉有耐酸和耐高温的特性，采用明矾来调节酸度和用酸米来抑制杂菌的方法，培养出纯度很高的红曲霉，这实际上就是一种选择性培养基。

从混合样品中获得某种微生物的方法，通常有两种：第一种办法可利用该分离对象对某一营养物质有一“嗜好”的原理，专门在培养基中加入该营养物，从而使它成为一种加富培养基。采用这类“投其所好”的策略即可使该微生物大大增殖，在数量上超过原有占优势的微生物，以达到富集培养的目的。用于加富的一些物质主要是一些特殊的碳源和氮源，如纤维素可被用来富集纤维素分解微生物，甘露醇用来富集自生固氮菌。第二种办法则可利用该分离对象对某种制菌物质的抗性，在混合培养物中加入该抑制物质，经培养后，由于原来占优势的他种微生物的生长受到抑制，而分离对象却可趁机大大增殖，使之在数量上占据优势。用于抑制他种微生物的选择性抑制剂有染料、抗生

2.

由于在土壤中几乎可找到任何微生物，所以土壤往往是首选的采集目标。土壤采样必须

（1）土壤中有机物的含量

有机物含量高，土质就肥，一般在其中微生物数量也越多，

（2）采土的深度

土壤的深度不同，其通气、养分和水分的分布情况也不同。表层的土壤由于直接受日光曝晒，故较干燥，微生物也不易大量繁殖。在离地面5～20 cm处的土壤，微生物含量最高

（3）植被情况

植被的种类与微生物的分布有着密切的关系。例如，在冬天灌水的水

（4）采土的季节

以春秋两季为宜。这时土壤中的养分、水分和温度都较适宜，微生物的数量也最多。采土时尤其应注意土壤中的含水量，水分过多会造成厌氧环境，不利于放线菌的生长繁殖。真菌虽需要较高的相对湿度，但基质中的水分却不宜过多。因此要避免在雨季采集土样。此外，土壤的pH也应适当注意，细菌和放线菌在中性或微碱性土壤中居多，

（5）采土方法

选择好适当地点后，用小铲子除去表土，取5～20 cm处的土样几十克，盛入事先灭过菌的防水纸袋内，并在上面记录采土时间、地点和植被等情况。

活学巧用

【例1】分析下面培养基的配方：KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂。请

（1）在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是 和 。

（2）想一想这种培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，又是如何进行选择的？

解题提示：碳源是提供碳元素的物质，氮源是提供氮元素的物质。所以碳源是葡萄糖，氮源是尿素。绝大多数生物都能利用葡萄糖，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，所以这种培养基对微生物有选择作用。选择的原则是只有能够利用尿素的微生物才能够生长。选择培养基筛选微生物的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH

答案：（1）葡萄糖

尿素

（2）有选择作用。因为此配方中尿素是唯一氮源，因此，只有能够利用尿素的微生物才能够生长。

6【例2】用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为10的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是（

A.涂布了一个平板，统计的菌落数是230

B.涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238

C.涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163

D.涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233

解题提示：在设计实验时，一定要涂布至少3个平板作为重复组；在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需重新实验。在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性，所以A、B不正确。C项虽涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另两个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板

答案：D